绿色荧光蛋白（Green fluorecent protein，GFP）最早是在海洋生物水母（Aequorea victoria）中发现的。GFP 蛋白的多肽链中含有特殊的生色团结构，可在紫外光源下发出稳定的绿色荧光，而且这种荧光发射无需外加辅助因子或进行任何特殊处理。GFP 标记分子最常作为标记物来追踪结合分子的表达水平和定位，或作为检测环境变化或蛋白相互作用的指标。目前广泛用于分子和细胞生物学各个领域。 取转染后24-72 hrs的细胞，置于倒...

在鸡胚绒毛尿囊膜的血管生成早起，机体免疫系统尚未完全建立，因此对各种异物几乎不发生排除反应，便于将含药物载体置于其表面，观察各种诱导剂和抑制剂对血管生成的影响。由于其对抗血管生成药物敏感，目前仍被认为是一种较理想的药物筛选模型。 1.  将种蛋置于鸡蛋架上，在37℃、湿度为20%~50%条件下孵育3~4天，每天原位转动。 2.  用比例为1：4000的甲醛水溶液清洗种蛋外壳，空气晾干后，移至超净台内。 3. ...

活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生命活动的一种染色方法。詹纳斯绿 B是线垃体的专一性活体染色剂。线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。 一、方法 1.  用空气栓塞处死兔子，置于解剖盘内，迅速打开腹腔。 2.  取兔肝边缘较薄的肝组织一小块（2~3 mm 3 ...

肿瘤生成过程中，成纤维细胞生长因子合成和释放增加，参与和诱导血管生成，是一个重要的血管生成诱导剂。因此，以成纤维细胞生长因子为诱导剂，能够促进体内各种模型的血管生成和体外内皮细胞迁移、粘附及增殖，观察药物对这些实验的影响，特别是其抑制作用，可以反映药物的抗血管生成效应。 一、成纤维细胞生长因子和肝素诱导基底膜蛋白提取物内的血管生成模型 1.  Matrigel 为一种基底膜提取物，主要由粘连蛋白、胶原蛋白、硫酸肝素。蛋白多糖和...

一、线粒体的光镜切片观察 1.  用詹纳斯绿B染色的兔肝细胞光镜切片，肝细胞中的线粒体呈蓝绿色的颗粒。 二、线粒体的电镜照片观察 1.  不同细胞中线粒体的形态和数目不同。线粒体的外形多样，如圆形、椭圆形、哑铃形和杆状。线粒体的数目与细胞类型和细胞的生理状态有关，线粒体多聚集在细胞生理功能旺盛的区域。 2.  线粒体脊的数目与分布方式是多种多样的。一般与...

采用植块培养方法时，用少量培养液孵育，使骨组织块贴附于培养瓶。骨组织块浮起后观察细胞长出情况。采用分离细胞的单层培养方法时，将松质骨切成 2~5mm 大小，用胶原蛋白酶和胰蛋白酶消化。将混悬的细胞接种于培养瓶，用 F12 培养液培养。 一、外植块培养 1. 从手术室获得骨标本。 2. 在室温条件下，用无菌生理盐水浸洗骨组织数次。 3. 如果骨组织不能及时使用，将骨标本放入含有...

无论原发性肿瘤还是继发性肿瘤，一旦生长直径超过1~2 mm，都会有血管生成。这是由于肿瘤细胞自身可分泌多种生长因子，诱导血管生成。 一、实验步骤 1.  用DEM培养液洗涤对数生长期的肿瘤细胞，收集并重新悬浮细胞于DEM培养液中。 2.  悬浮的肿瘤细胞与1.2%藻酸钠溶液混合，稀释后的藻酸钠浓度为0.8%，细胞浓度为（1~5）×10 6 细胞/ml。 ...

中性红是液泡系特殊的活体染色剂，只将液泡系染成红色，在细胞处于生活状态时，细胞质及核不被染色，中性红染色可能与液泡中的蛋白有关。 一、蟾蜍胸骨剑突软骨细胞液泡系活体染色及观察 1.  方法 （1）取一只蟾蜍，破坏脑和脊髓，剪开胸腔。 （2）取胸骨剑突软骨最薄部分的一小片，放在载片上。 （3）滴两滴1/3000中性红染液，染色8~10分钟，用吸水纸吸...

微丝普遍存在于多种细胞，对细胞的形状和运动有一定作用。细胞松驰素B可与微丝的亚单位肌动蛋白结合，从而破坏微丝，改变细胞的形状 一、方法 1.  在平皿中有三张成纤维细胞贴壁生长的盖片，在超净工作台内将一张盖片移入另一皿中继续培养，用作对照。 2.  在有两片的平皿内加100 μg/ml 的细胞松弛素B 4滴继续培养半小时。 3.  将用细胞松弛素B处理过的两张盖片取一张做...

提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含SDS（十二烷基硫酸钠）和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质，再用酚和氯仿/异戊醇抽提分离蛋白质，得到的DNA溶液经乙醇沉淀使DNA从溶液中析出。 1.  培养100 ml 细菌培养物至饱和状态，用JA-20转子4 000 g 离心10 min。 2.  用9.5 ml 的TE缓冲液重悬沉淀。 3.  加0.5 ml 10%的SDS和50 μl 20 mg/...