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荧光原位杂交实验-基本方案

1a.  石蜡切片或细胞的杂交:按“”的基本方案步骤1~7,对载玻片进行脱蜡、水化、 封闭和脱水处理。将标本晾干(或在干燥器中干燥),随后贮于加有干燥剂的载玻片盒中,置-70℃过夜。 1b.  冰冻切片的杂交:按“”的备择方案步骤1~7,进行切片的预处理和乙酰化处理, 随后进行切片的脱水。 2.  对每一杂交实验,可用乙醇沉淀10~15 ng 探针,重溶于10 ml 去离子的甲酰胺中,加5 μg(0.5 μl)超声处理的...

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细胞生理活动的观察实验-细胞的吞噬活动

白细胞是机体防御系统中能游走的单位。它分为粒细胞系、单核细胞系、淋巴系三类。它们有许多生理功能,如游走性、变形运动、趋化性、吞噬异物等。在白细胞中,以粒细胞、单核细胞的吞噬活动较强,故称此二类细胞为吞噬细胞。单核细胞由血液进入组织后逐渐演变成巨噬细胞。吞噬细胞主要靠吞噬来处理异物。吞噬细胞首先由于趋化作用而向异物游走,然后伸出伪足包围异物,并发生内吞作用形成吞噬泡将异物吞入细胞,继而溶酶体与吞噬泡融合消化异物。 1.  实验前二天,每天向小鼠腹腔注射6%淀粉肉...

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细胞膜流动性测定实验

常用于研究膜脂流动性的荧光探针为1,6-二苯基-1,3,5-己三烯(DPH)。DPH掺入到细胞膜脂烃链区后,介质粘度增加,顺反异构受到抑制,成为唯一能发光的全反构型。 1.  取对数生长期的肿瘤细胞,以pH7.2,0.01 mol/l 磷酸盐缓冲液洗涤两次。 2.  取10 7 个细胞,离心,加入2×10 6 mol/l DPH溶液2 ml。 ...

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方案23.18 血管内皮细胞的分离和培养-分离人心脏内皮细胞(HCEC)

根据 McDouall 等 [ 1996 ] 的方法可以分离人的 CEC。 1. 按分离小鼠心脏内皮细胞的步骤操作。 2. 在步骤 7 用 Ⅱ 型胶原蛋白酶(1 mg/ml)消化组织。 3. 按照方案23.28C 的步骤 20,用包被人 MHC-Ⅱ 类抗原或 CD31 抗体的磁珠分选内皮细胞。然后,从方案23. 28C 的步骤23 继续操作。 4. 用 HCEC 生长培养液(含有 4...

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方案23.18 血管内皮细胞的分离和培养-分离小鼠心脏内皮细胞(MCECs)

本方法是由 Marelli-Berg 等 [ 2000 ] 的方法改写的。 1. 将心脏放入盛有约 5 ml HBSS/PS(HBSS,添加 150 U/ml 青霉素和 150 μg/ml 链霉素) 的 Petri 培养皿。 2. 除去主动脉和肺动脉等与心脏相连的血管。 3. 将心脏(小鼠心脏:放入含有 300 U/ml 青霉素和链霉素混合液、50 μg/ml 庆大霉素的 HBSS/PSG)切成两半,取出较大...

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方案23.18 血管内皮细胞的分离和培养-分离牛主动脉内皮细胞(PAECs)

本方法是由 Bravery 等 [ 1995 ] 的方法改写的。 1. 将铝箔铺在软木板上。 2. 将主动脉(新鲜猪主动脉:如条件允许,需无菌取材。放入 HBSS/PSGA 中转运)放于 70 % 乙醇浸泡的棉纸上面,然后轻拍动脉以吸干表面的液体。 3. 在铝箔覆盖的软木板上,修剪主动脉周围组织,只保留分支。不要将分支剪得过短。 4. 用线结扎分支,夹住主动脉细端。 ...

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细胞器的观察实验 -电镜切片

一、高尔基复合体(Golgi Complex) 1.  人体胃粘膜细胞高尔基复合体电镜照片:细胞质中有散在的高尔基复合体,其结构要由三部分组成:扁平囊、大囊泡和小囊泡,它们共同构成紧密重叠的囊泡结构。 2.  扁平囊约3~8层,它们平行排列,略弯曲成弓形。 3.  凸出的一侧为形成面,可见许多小囊泡,凹入的一侧为成熟面,可见扁平囊末端呈球形膨大,在分泌细胞中膨大部分不断脱离扁平...

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细胞形态的观察实验-丽藻细胞内胞质环流

丽藻细胞大,整个细胞的中央为大液泡占据。靠近液泡是一层溶胶样流动的内质,在内质与质膜之间,为静止的外质,其中含有叶绿体。内质中含有许多颗粒,可以清楚地看到胞质环流。在丽藻细胞中的微丝与胞质环流有密切关系。成束的微丝出现在外质与内质接口(溶胶和凝胶接口)并交织一起,与环流方向平行。用细胞松弛素B处理后,就可抑制胞质的环流运动。 一、方法 1.  剪下一小块丽藻叶片(1~2 cm),置于载片上,盖上盖片。 ...

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细菌中制备基因组DNA实验-氯化铯法

提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含SDS(十二烷基硫酸钠)和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质,再用酚和氯仿/异戊醇抽提分离蛋白质,得到的DNA溶液经乙醇沉淀使DNA从溶液中析出。 1.  培养100 ml 细菌培养物至饱和状态,用JA-20转子4 000 g 离心10 min。 2.  用9.5 ml 的TE缓冲液重悬沉淀。 3.  加0.5 ml 10%的SDS和50 μl 20 mg/...

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细胞形态的观察实验-成纤维细胞微丝的染色

微丝普遍存在于多种细胞,对细胞的形状和运动有一定作用。细胞松驰素B可与微丝的亚单位肌动蛋白结合,从而破坏微丝,改变细胞的形状 一、方法 1.  在平皿中有三张成纤维细胞贴壁生长的盖片,在超净工作台内将一张盖片移入另一皿中继续培养,用作对照。 2.  在有两片的平皿内加100 μg/ml 的细胞松弛素B 4滴继续培养半小时。 3.  将用细胞松弛素B处理过的两张盖片取一张做...

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