细胞凋亡时主要的生化特征是其染色质发生浓缩, 染色质DNA 在核小体单位之间的连接处断裂, 形成50~300 kbp 长的DNA 大片段, 或180~200 bp 整数倍的寡核苷酸片段, 在凝胶电泳上表现为梯形电泳图谱（DNA ladder）。细胞经处理后，采用常规方法分离提纯DNA，进行琼脂糖凝胶和溴化乙啶染色，在凋亡细胞群中可观察到典型的DNA ladder。如果细胞量很少，还可在分离提纯DNA 后，用32P-ATP 和脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT）使DNA ...

线粒体在细胞凋亡的过程中起着枢纽作用，多种细胞凋亡刺激因子均可诱导不同的细胞发生凋亡，而线粒体跨膜电位的下降，被认为是细胞凋亡级联反应过程中最早发生的事件，它发生在细胞核凋亡特征（染色质浓缩、DNA 断裂）出现之前，一旦线粒体DYmt 崩溃，则细胞凋亡不可逆转。 线粒体跨膜电位的存在，使一些亲脂性阳离子荧光染料如Rhodamine 123、3,3-Dihexyloxacarbocyanine iodide[DiOC6 （ 3 ） ] ...

1.  以每1.8×10 7 细胞的密度接种Sf9细胞于至少10个150 cm 2 培养瓶中。27℃温育约2 h，让细胞牢固贴壁，以0.1的感染复数用野生型AcMNPV感染。当观察到多数细胞中含有包涵体时，将病毒上清（约200 ml）转移至4个50 ml 锥形管中。 2.  4℃ 1 000 g 离心10 min，将病毒上清倒入4个新的管子中。重复离心...

1.  接种2×10 6 个Sf9细胞于60 mm 培养皿，在含10%胎牛血清的完全培养液或无血清培养液中培养，于27℃培养30~60 min，让细胞贴壁。 2.  相应于毎一待转染的培养皿，吸取40 μl 无菌水，加入一支无菌聚苯乙烯管中，加入5 μl 线性化的AcMNPV DNA和5 μl 100 ng/μl 的质粒DNA。将Lipofectin 充分混匀后，往DNA溶液中加入5...

生物显微摄影（Microphotography）是利用摄影装置来拍摄显微镜视野中所观察到的物像。在生物医学方面，主要用于对正常细胞或病变细胞的显微形态学研究记录。 一、拍摄前准备 1.  光路合轴  使光轴与光束处于同一轴线上。 2.  柯勒氏照明  使观察的视野获碍均匀而又充分的照明；防止杂散光对照相系统产生影响；使被摄物体不受热，影象清晰。 3.  物镜与目镜合理组合...

生化和免疫化学研究证明银染蛋白是RNA聚合酶I，其功能是催化rDNA转录rRNA形成核仁，因此通过这种反应能够特异显示rRNA转录的活性。 一、中期染色体核仁形成区的银染和观察 1.  取制备好的正常或肿瘤细胞染色体标本，直接放入装有5 N HCl溶液中，常温处理5分钟。 2.  用自来水反复冲洗几次，甩干，标本面朝上平放在平皿中。 3.  将0.1%甲酸临用前配制的50...

5-溴脱氧尿嘧啶核苷（5-Bromodeoxyuridinc简称BrdU）是胸腺嘧啶核苷的类似物。人体淋巴细胞在含有BrdU的培养液中进行DNA复制时，BrdU可专一替代胸腺嘧啶核苷，而掺入到新复制的DNA核苷酸链中。因此只要通过两个复制周期，就可使姊妹染色单体中一条单体的DNA链中，有一股链是掺入BrdU的，而另一条单体的DNA双链，两股链全掺入BrdU。由于双股都含有BrdU的DNA分子构形有变化，使这条染色单体对某些染色剂的亲合力降低，用Giemsa染液染色时就可清楚看到双股...

用人结肠癌细胞为免疫原，免疫小鼠，制得鼠抗人结肠癌细胞表面抗原（Ag）的单克隆抗体IgG（第一抗体），二者可以发生特异性的抗原抗体反应，形成抗原抗体复合物，再加入市售（也可自制）的荧光标记的羊抗鼠IgG抗体（第二抗体），可以与复合物进一步发生抗原抗体反应（二次抗体反应），这样就可以在光显微镜下观察到这种抗原在结肠癌细胞表面的存在。 1.  将培养瓶中的结肠癌细胞接种到装有盖片的培养皿中，培养2~3天。 2.  在倒置镜下观察到盖...

高锰酸钾固定液能除掉细胞内的蛋白质成份，而保留膜的脂类成分，其结果，细胞骨架和细胞内可溶性蛋白质等被去除，增加了标本的透明度，同时内质网、线粒体、高尔基体、溶酶体等生物膜系统被完整地保存下来。高锰酸钾固定剂在固定标本的过程中，能形成二氧化锰，可在细胞的各种膜结构的脂类亲水端形成微细的沉淀，结果标本不需染色，即能在相差显微镜和透射电镜下清晰地显示细胞生物膜系统全貌。 一、高锰酸钾固定法显示用药（秋水仙素处理）前后CV-1细胞生物膜系统光镜标本的制备及观察。 ...

Gomori硝酸铅改良法是根据：以磷酸酯为底物，其被磷酸酶水解后释放出磷酸基，在pH5左右和铅盐结合成磷酸铅盐，但磷酸铅无色，须经硫化铵作用使其变成棕黄色至棕黑色的硫化铅沉淀。 1.  将培养的427细胞在冷丙酮或95%乙醇中固定15~30分钟。 2.  待片干燥。 3.  移入已预热（37℃）的作用液中孵育2小时。 4.  蒸馏水洗。 5.  移入2%醋...