野生型杆状病毒的纯化实验
1. 以每1.8×10 7 细胞的密度接种Sf9细胞于至少10个150 cm 2 培养瓶中。27℃温育约2 h,让细胞牢固贴壁,以0.1的感染复数用野生型AcMNPV感染。当观察到多数细胞中含有包涵体时,将病毒上清(约200 ml)转移至4个50 ml 锥形管中。 2. 4℃ 1 000 g 离心10 min,将病毒上清倒入4个新的管子中。重复离心...
查看详情1. 以每1.8×10 7 细胞的密度接种Sf9细胞于至少10个150 cm 2 培养瓶中。27℃温育约2 h,让细胞牢固贴壁,以0.1的感染复数用野生型AcMNPV感染。当观察到多数细胞中含有包涵体时,将病毒上清(约200 ml)转移至4个50 ml 锥形管中。 2. 4℃ 1 000 g 离心10 min,将病毒上清倒入4个新的管子中。重复离心...
查看详情1. 接种2×10 6 个Sf9细胞于60 mm 培养皿,在含10%胎牛血清的完全培养液或无血清培养液中培养,于27℃培养30~60 min,让细胞贴壁。 2. 相应于毎一待转染的培养皿,吸取40 μl 无菌水,加入一支无菌聚苯乙烯管中,加入5 μl 线性化的AcMNPV DNA和5 μl 100 ng/μl 的质粒DNA。将Lipofectin 充分混匀后,往DNA溶液中加入5...
查看详情生物显微摄影(Microphotography)是利用摄影装置来拍摄显微镜视野中所观察到的物像。在生物医学方面,主要用于对正常细胞或病变细胞的显微形态学研究记录。 一、拍摄前准备 1. 光路合轴 使光轴与光束处于同一轴线上。 2. 柯勒氏照明 使观察的视野获碍均匀而又充分的照明;防止杂散光对照相系统产生影响;使被摄物体不受热,影象清晰。 3. 物镜与目镜合理组合...
查看详情生化和免疫化学研究证明银染蛋白是RNA聚合酶I,其功能是催化rDNA转录rRNA形成核仁,因此通过这种反应能够特异显示rRNA转录的活性。 一、中期染色体核仁形成区的银染和观察 1. 取制备好的正常或肿瘤细胞染色体标本,直接放入装有5 N HCl溶液中,常温处理5分钟。 2. 用自来水反复冲洗几次,甩干,标本面朝上平放在平皿中。 3. 将0.1%甲酸临用前配制的50...
查看详情5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-Bromodeoxyuridinc简称BrdU)是胸腺嘧啶核苷的类似物。人体淋巴细胞在含有BrdU的培养液中进行DNA复制时,BrdU可专一替代胸腺嘧啶核苷,而掺入到新复制的DNA核苷酸链中。因此只要通过两个复制周期,就可使姊妹染色单体中一条单体的DNA链中,有一股链是掺入BrdU的,而另一条单体的DNA双链,两股链全掺入BrdU。由于双股都含有BrdU的DNA分子构形有变化,使这条染色单体对某些染色剂的亲合力降低,用Giemsa染液染色时就可清楚看到双股...
查看详情用人结肠癌细胞为免疫原,免疫小鼠,制得鼠抗人结肠癌细胞表面抗原(Ag)的单克隆抗体IgG(第一抗体),二者可以发生特异性的抗原抗体反应,形成抗原抗体复合物,再加入市售(也可自制)的荧光标记的羊抗鼠IgG抗体(第二抗体),可以与复合物进一步发生抗原抗体反应(二次抗体反应),这样就可以在光显微镜下观察到这种抗原在结肠癌细胞表面的存在。 1. 将培养瓶中的结肠癌细胞接种到装有盖片的培养皿中,培养2~3天。 2. 在倒置镜下观察到盖...
查看详情高锰酸钾固定液能除掉细胞内的蛋白质成份,而保留膜的脂类成分,其结果,细胞骨架和细胞内可溶性蛋白质等被去除,增加了标本的透明度,同时内质网、线粒体、高尔基体、溶酶体等生物膜系统被完整地保存下来。高锰酸钾固定剂在固定标本的过程中,能形成二氧化锰,可在细胞的各种膜结构的脂类亲水端形成微细的沉淀,结果标本不需染色,即能在相差显微镜和透射电镜下清晰地显示细胞生物膜系统全貌。 一、高锰酸钾固定法显示用药(秋水仙素处理)前后CV-1细胞生物膜系统光镜标本的制备及观察。 ...
查看详情Gomori硝酸铅改良法是根据:以磷酸酯为底物,其被磷酸酶水解后释放出磷酸基,在pH5左右和铅盐结合成磷酸铅盐,但磷酸铅无色,须经硫化铵作用使其变成棕黄色至棕黑色的硫化铅沉淀。 1. 将培养的427细胞在冷丙酮或95%乙醇中固定15~30分钟。 2. 待片干燥。 3. 移入已预热(37℃)的作用液中孵育2小时。 4. 蒸馏水洗。 5. 移入2%醋...
查看详情带有特异抗原的靶细胞(如正常细胞、肿瘤细胞、病毒感染细胞)与相应抗体结合后,在补体的参与下,引起靶细胞膜损伤,导致细胞膜的通透性增加、细胞死亡。染料(例如:伊红-Y、台盼蓝)可通过细胞膜进入细胞内使细胞着色,故可用于指示死细胞或濒死细胞,而活细胞不着色。此即补体依赖性细胞毒试验,利用细胞毒试验可以检查细胞膜抗原,亦可鉴定抗体的特异性。 本实验中,Thy-1抗原是小鼠胸腺T细胞特异的表面抗原,在体外利用抗小鼠Thy-1的单克隆抗体通过补体的协同作用,可杀伤95%以上的胸腺细胞...
查看详情瑞氏染料中有美蓝和伊红两种成分,前者为碱性,后者为酸性,它们与细胞内的各种物质具有不同的亲和力,使其显现出不同的色调。血细胞核由去氧核糖核酸和强碱性的组蛋白、精蛋白等形成核蛋白。这种强碱性的物质与瑞氏染料中的酸性染料伊红有亲和力,所以染成红色;核蛋白中还有少量的弱酸性蛋白,它们又与染液中的碱性染料美蓝起作用而染成蓝色,但含量太少,蓝色反应极弱 ,故核染色呈现紫红色。较幼稚的细胞之胞浆和细胞核之核仁中含有酸性物质,它们与染料中的碱性染料美蓝有亲和力,故染成蓝色。 ...
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