APAAP（Alkaline phosphatase-anti-alkaline phosphatase technique）技术的基本原理为：抗 鼠IgG抗体作为桥梁，将鼠源性识别细胞抗原的第一抗体与鼠源性的抗碱性磷酸酶单克隆 抗体-碱性磷酸酶复合物相连接，使之成为Ag，-Ab1－Ab2-anti AP-AP的复合物。还可 通过二抗将APAAP 复合物重复叠加起来，从而使多个碱性磷酸酶标记于组织细胞上第一 ...

Percoll是一种包有乙烯吡咯烷酮的硅胶颗粒。渗透压很低（<20 mosm/kg H 2 O）， 粘度也很小，可形成高达1.3 g/ml密度，采用预先形成的密度梯度时可在低离心 力（200～1000 g）于数分至数十分钟内达到满意的细胞分离结果。由于Percoll扩散常数 低，所形成的梯度十分稳定。此外，Percoll不穿透生物膜，对细胞无毒害，因此广 ...

1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临床疾病的诊、防、治提供了新的工具。   制备单克隆抗体包括动物免疫、细胞融合、选择杂交瘤、检测抗体、杂交瘤细胞的克隆化、冻存以及单克隆抗体的大量生产，要经过几个月的一系列实验步骤。 一、细胞融合前准备 ...

1.  标记和洗涤细胞（温和去污裂解法，步骤1~7）。 2a.  对于贴壁细胞：加入适量SDS裂解液至培养皿中。（35 mm 培养皿加0.1 ml，50 mm 培养皿0.25 ml，100 ml 培养皿0.5 ml）立即用橡皮细胞刮于刮下细胞并转移至带螺口盖的微量离心管中。 2b.  对于非贴壁细胞：在旋涡混合器上短暂振荡细胞沉淀使之松散，加入1 ml SDS裂解缓冲液（毎5×10 7...

1.  培养待标记的细胞至适当的生长期。 对于贴壁细胞： 2a.  吸去培养液，用37℃的含血清不加标记物的标记培养液洗尽残存的含磷酸盐培养液，吸尽该培养液。 3a.  加入预热的标记培养液，加入量为：0.5~1 ml/35 mm 培养皿，1~2 ml/50 mm 培养皿，或2~4ml/ 100 mm 培养皿。 对于非贴壁细胞： ...

1.  将目的基因亚克隆至合适的载体中得到所需的重组DNA，用小量法（5 ml 培养物）或用CsCl/溴化乙锭离心法纯化重组DNA。 2.  将在DMEM-10 CS中生长汇片的COS-7细胞（每100 mm 培养皿约细胞）在转染的前一天以1：5的比例分瓶，这样第二天细胞将长至约50%汇片的程度，让细胞在 CO 2 培养箱中于37℃生长过夜至约50%汇片。 3...

在本实验中，已经介绍了将荧光素标记的Annexin-V 作为荧光探针，利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。碘化丙啶（propidine iodide, PI）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但在凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI 能够透过细胞膜而使细胞核红染。因此将Annexin-V 与PI 匹配使用，就可以将凋亡早晚期的细胞以及死细胞区分开来。 ...

根据凋亡细胞固有的形态特征，人们已经设计了许多不同的细胞凋亡形态学检测方法。 一、光学显微镜和倒置显微镜 1.  未染色细胞 凋亡细胞的体积变小、变形，细胞膜完整但出现发泡现象，细胞凋亡晚期可见凋亡小体。 贴壁细胞出现皱缩、变圆、脱落。 2.  染色细胞 常用姬姆萨染色、瑞氏染色等。凋...

Caspase 家族在介导细胞凋亡的过程中起着非常重要的作用， 其中caspase-3 为关键的执行分子，它在凋亡信号传导的许多途径中发挥功能。Caspase-3 正常以酶原（32KD）的形式存在于胞浆中，在凋亡的早期阶段，它被激活，活化的Caspase-3 由两个大亚基（17KD）和两个小亚基（12KD）组成，裂解相应的胞浆胞核底物，最终导致细胞凋亡。但在细胞凋亡的晚期和死亡细胞，caspase-3 的活性明显下降。 一、Weste...

细胞凋亡时主要的生化特征是其染色质发生浓缩, 染色质DNA 在核小体单位之间的连接处断裂, 形成50~300 kbp 长的DNA 大片段, 或180~200 bp 整数倍的寡核苷酸片段, 在凝胶电泳上表现为梯形电泳图谱（DNA ladder）。细胞经处理后，采用常规方法分离提纯DNA，进行琼脂糖凝胶和溴化乙啶染色，在凋亡细胞群中可观察到典型的DNA ladder。如果细胞量很少，还可在分离提纯DNA 后，用32P-ATP 和脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT）使DNA ...