一、准备 1.  原辅料的处理: 根据药材的有效成分不同，可采用不同的溶剂和方法进行提取，一般多用煎煮法提取有效成分，用等量乙醇精制时放置的时间、回收乙醇后放置的时间可根据实验安排情况，适当延长，以沉淀完全，上清液易于分离为宜。 2.  制颗粒：掌握湿法制粒的操作方法。控制清膏的相对密度时由于生产量较小，不方便用比重计测量，也可用桑皮纸上测水印的方法适当掌握，以不出现、或仅有少量水印为度；加辅料的量一般不超过...

1.  将当归，黄芪（蜜炙），牛膝，防风4味，粉碎或粗粉。 2.  按渗漉法，用白酒2400 ml与黄酒8000 ml的混合液作溶剂，浸渍48小时后，缓缓渗漉。 3.  在渗漉液中加入蔗糖840 g搅拌溶解后，静置，滤过，即得。 注意事项 1.  高血压患者慎用。 2.  孕妇忌服。 ...

限制性内切酶可识别特定位点并切割DNA产生粘性末端或平端的外源片段，经DNA的纯化处理后用于连接反应；选择克隆载体pUC18多克隆位点上相应的限制性内切酶切割，并用碱性磷酸酶处理防止载体自连；在连接酶的作用下将外源片段连接到载体上，实现外源片段的克隆。 1.  载体pUC18和外源DNA片段的限制性酶切： 50 μl反应体系，用1.5ml tube，冰上操作） DNA           30 ...

1.  提取 称取（10 ± 0.1）g经捣碎样品于一个100 mL离心瓶中，加入15 mL 的乙酸钠缓冲溶液（0.2 mol/L，pH 5.2），混合2 min。添加120 ng作为内标物的美托洛尔于全部肝、肾和肉的待测样品中。加50 uL的β-盐酸葡萄糖酸苷酶-芳基硫酸酯酶，加盖后超声振荡15 min。于恒温箱中37 ℃培养16 h。加入10 mL 0.1 mol/L的高氯酸，混合均匀并用11.7 m...

1.  试剂和材料 衍生化试剂1:五氟苄基溴（PFBBr）（pentafluorobenzyi bromide，97%）。 衍生化试剂2: N-甲基-N-三甲基硅基-三氟乙酰胺（MSTFA）[N- methyl-N-（trimethylsilyl）-trifluoroacetamide,97%]。硅胶：40 ～ 63 um，10 nm （100A）。乙醇钠/乙醇：称取0.2 g NaO...

琼脂糖凝胶电泳作为鉴定大分子物质经常被使用, 但含有RNase 酶活性, 因此要使RNase 变性而不使RNA 变性的, 故采用甲醛变性凝胶电泳鉴定RNA。 1.  制备凝胶: 琼脂糖浓度1 . 2% , 加入5×甲醛凝胶电泳缓冲液和甲醛, 使两者的终浓度分别为1×甲醛凝胶电泳缓冲液和2.2 mol/ L; 2.  取一定量的RNA 样品, 加入5 × 甲醛凝胶电泳缓冲液2 . 0 μl , 37%甲醛3 . 5...

在液氮中研磨植物材料, 使部分细胞破碎, 进一步使植物细胞在裂解液中裂解, 用醋酸钠和氯仿沉淀蛋白质, 异丙醇沉淀核酸, 溶解后经氯化锂沉淀总RNA, 洗涤后得到高质量的RNA。本实验旨在了解和掌握植物总RNA 的分离和纯化方法。 取5～10 g 材料放入研钵中, 加入过量液氮, 迅速研磨成均匀的粉末(在研磨过程中, 保证材料始终浸在液氮中, 研磨约30 min) 。 待液氮自然挥发干净后, 将材料转入100 ml...

当DNA 的稀盐溶液加热到80～100 ℃ 时, 双螺旋结构即发生解体, 两条链分开, 形成无规线团。一系列物化性质也发生改变: 260 nm 区紫外吸收值增高(增色效应) , 粘度降低, 浮力密度降低等。DNA 的变性的特点是爆发式的, 变性作用发生在一个很窄的范围。通常把DNA 的双螺旋结构失去一半时的温度称为该DNA 的熔点或熔解温度( melting temperature ) , 用Tm 表示。DNA 的Tm 值一般在70～85 ℃之间。   ...

核酸、核苷酸及衍生物都具有共轭双键系统, 能吸收紫外光, RNA、DNA 的紫外吸收高峰在260 nm 波长处。一般在260 nm 波长下, 每1 ml 含1 μg RNA 的溶液光吸收值为0.022 , 每1 ml 含1 μg DNA 的溶液光吸收值约为0.020 , 故测定未知浓度RNA 或DNA 溶液在260 nm 的光吸收值即可计算出其中核酸的含量。此法操作简便、迅速。若样品内混有大量的核苷酸或蛋白质等能吸收紫外光的物质, 则测定误差较大, 故应该先除去。 ...

根据核糖核蛋白与脱氧核糖核蛋白在一定浓度的氯化钠溶液中的溶解度不同进行分离, 然后用蛋白质变性沉淀剂去除蛋白,使核酸释放出来, 再利用核酸不溶于乙醇的性质将核酸析出, 达到分离提纯的目的。   在0 . 14 mol/ L 的氯化钠溶液中, RNA 核蛋白(RNP) 溶解度大, 而DNA 核蛋白( DNP) 溶解度较小; 相反, 在1 mol/ L的氯化钠溶液中, DNP 溶解度最大, 而RNP 溶解度却很小, 从而使DNA、RNA 核蛋白分开。核蛋白分离后可...