1.  将融合蛋白在≥10倍体积的20 mmol/l Tris·Cl（pH7.4）/6 mol/l 盐酸胍中透析4 h，或将盐酸胍加入融合蛋白中至终浓度为6 mol/l。 2.  将样品在100倍体积的20 mmol/l Tris·Cl（pH8.0）/1 mmol/l CaCl 2 透析4 h。 3.  更换100倍体积的新鲜缓冲液重复步骤2，继续透折4...

1.  准备两个小量预试验以确定最佳裂解反应条件： （1）反应1：20 μl 1 mg/ml 融合蛋白溶液（在合适的缓冲液中）及0.2 μg 凝血酶。 （2）反应2：5 μl 1 mg/ml 融合蛋白溶液（模拟消化），25℃下温育反应。 2.  在30 min、1 h、2 h 和4 h 等时刻从反应1中分别取出5 μl 反应液与5 μl 2×SDS样品缓冲液...

1.  将融合蛋白在≥10倍体积的20 mmol/l Tris·Cl（pH7.4）/6 mol/l 盐酸胍中透析4 h，或将盐酸胍加入融合蛋白中至终浓度为6 mol/l。 2.  将样品在100倍体积的20 mmol/l Tris·Cl（pH8.0）/1 mmol/l CaCl 2 透析4 h。 3.  更换100倍体积的新鲜缓冲液重复步骤2，继续透折4...

1.  准备两个小量预试验反应以确定最佳温育时间： （1）反应1：20 μl 含有1 μl 200 μg/ml Xa因子的1 mg/ml 融合蛋白，室温下反应 （2）反应2：5 μl 不含因子Xa的1 mg/ml 融合蛋白（模拟消化），室温下反应。 2.  分别在2、4、8和24 h取出5 μl 反应液，加2×SDS样品缓冲液5 μl，-20℃下冻存。 3.  ...

1.  将表达载体转化一种复制缺陷型的大肠杆菌cI + 溶源菌。转化物涂布于LB/抗生素平皿上并于37℃下温育。 2.  在LB/抗生素培养基中，37℃过夜培养转化细胞。 3.  以≥1：20的比例将过夜培养物稀释于新鲜的LB/抗生素培养基中。37℃，250~300 r/min 速度振荡培养至OD 650 =0.4...

1.  将表达载体转化携有温度敏感突变的抑制基因的大肠杆菌溶源菌。转化物涂布于LB/抗生素平皿上，32℃下温育。 2.  于抗生素培养基中，32℃培养转化菌。 3.  以≥1：20的比例将过夜培养物稀释往新鲜的LB/抗生素培养基中，在32℃以250~300 r/min 转速振荡培养直至OD 650 =0.6~0.8。 4.  在摇动下，加1/3体...

1.  制备从M13噬菌体mGP1-2原种，加PEG溶液沉淀浓缩噬菌体。重悬噬菌体于M9培养基，滴定其滴度。 2.  将由“基本方案”步骤1所得的含T7 启动子表达质粒转化M13许可性大肠杆菌细胞，转化物涂布于氨苄青霉素平皿上，37℃培养过夜。挑取独立转化菌落，接种于LB/氨苄青霉素培养基中，37℃温育过夜。 3.  将过夜培养物以1：100比例稀释于LB/氨苄青霉素培养基中，37℃缓缓振荡培养至OD ...

1.  将含有待表达基因的片段亚克隆于pT7-5、pT-6或pT7-7中，转化一种标准大肠杆菌菌株，此菌株不应带有可指导T7 RNA聚合酶合成的质粒。转化物涂布于氨苄青霉素平皿，于37℃温育培养过夜。 2.  挑取独立的转化菌落于LB/氨苄青霉素培养基中，37℃培养，通过小量制备方法获得质粒DNA。以限制性酶谱分析确证基因正确插入与否。 3.  从pGP1-2转化大肠杆菌K38株涂布LB/卡那霉素...

1.  将含有待表达基因的片段亚克隆于pT7-5、pT-6或pT7-7中，转化一种标准大肠杆菌菌株，此菌株不应带有可指导T7 RNA聚合酶合成的质粒。转化物涂布于氨苄青霉素平皿，于37℃温育培养过夜。 2.  挑取独立的转化菌落于LB/氨苄青霉素培养基中，37℃培养，通过小量制备方法获得质粒DNA。以限制性酶谱分析确证基因正确插入与否。 3.  从pGP1-2转化大肠杆菌K38株涂布LB/卡那霉素平皿上，30℃下...

1. 取血后，37℃下，让血液凝固1 到2 小时（不加抗凝剂）； 2. 4℃冰箱过夜（让血块固缩）； 3. 当血清自然析出后， 4℃，3000 转/分，离心10 分钟，分离血清，弃去不溶物； 4. 将血清移至一干净试管，并分装成小份，储藏在-80℃。 ...