1.  电泳分离目标蛋白并转移到硝酸纤维素膜。 2.  将硝酸纤维素膜放入盛有50 ml 含0.1%丽春红S料的1%乙酸水溶液的经酸洗的petri 玻璃培养皿。轻轻摇动1 min。 3.  将膜移入1%乙酸1 min，如有需要，换液至条带显迹清晰。 4.  穿带无粉尘手套用刀片将目标蛋白条带切下，小心切去多余的硝酸纤维素膜后，放入微量离心管中，取一片空白膜作对照。 ...

1.  制备分离胶和积层胶溶液灌制变性微型凝胶。 2.  组装垂直凝胶电泳装置。 3.  将80 ml 4×凝胶缓冲液稀释至320 ml。将200 ml 1×凝胶缓冲 液倒入下层缓冲液槽。 4.  剩余的1×凝胶缓冲液加入还原型谷胱甘肽（干粉）至终浓度1 mmol/l，将它们倒入上层缓冲液贮槽。将凝胶连接于恒压/恒流电源。 5.  10 mA 下预电泳45 m...

1.  准备和用［ 35 S］甲硫氨酸标记细胞，用0.2~1 mCi/ml 的［ 35 S］甲疏氨酸脉冲标记细胞5~30 min。 2.  脉冲标记后，除去［ 35 S］甲硫氨酸培养基，用10 ml 于37℃追加培养基冼细胞1次，加入10 ml 追加培养基继续培养。 3.  在37℃温...

1.  在100 mm 直径的培养皿上培养贴壁细胞（0.5~2×10 7 ）至70%~90%汇片，吸去培养液，用10 ml 于37℃短时间标记培养基轻轻搖晃冼两次细胞。 2.  加入5 ml 于37℃短时间标记培养基，在5%CO 2 的加湿培养箱于37℃温育15 min，以耗尽细胞内的甲硫氨酸。 3. ...

1.  培养悬浮细胞至对数增长期，室温300 g 离心5 min。回收10 7 ~10 8 细胞。 2.  每2×10 7 细胞用约10 ml 37℃的短时间标记培养基在圆锥型试管中洗涤，于室温300 g 离心5 min 回收细胞，小心重悬细胞并重复洗涤过程。 3.  ...

RAPD作为单引物的PCR扩增产物，其产生机理是引物首先结合到模板链，沿模板5’端方向延伸而产生不同长度的DNA片段，然后以这些片段为模板继续大量扩增。由于RAPD反应中，在3’端没有相应引物和模板互补，这样必然存在一个由引物沿模板DNA 5’端方向延伸后再在3’端形成同一引物互补序列的过程。 有人提出，在RAPD反应过程中，扩增可能存在一些这样的分子模式： （1）5’端带有引物的单链DNA分子在3’端发生折转、自身结合和延伸，并在3’端形成同一引物的互补序列，变性展开后即可成...

1.  按基本方案进行，但以下说明的操作步骤已经修改： （2b）按所需选用步骤4b所提供的其中之一备择物（①，②，③）预澄清放射性抗原溶液。 （4b）加入1 μl 抗原特异性抗血清，或3 μg 抗原特异性单抗，或抗质特异性杂交瘤培养上 清（克隆化细胞系来源的加30 μl，未克隆化来源的加100 μl）。然后按①，或②、或③进行操作： ①加入1：1抗Ig抗体-Sepharose偶联物...

1.  按基本方案进行，但以下说明的操作步骤已经修改： （2a）按每毫升加入2 μl 正常血清的量对放射性标记抗原进行预澄清处理，加入适量的抗血清，于4℃放置12~18 h， 111 000 g 离心10 min，保留上清。 （4a）加入1 μl 抗原特异性抗血清，3 μg 抗原持异性纯化单抗，或抗原特异性杂交瘤培养上清（克隆细胞系来源的加30 μl 或未克隆细胞系来源的加100 μl），用漩涡混合器混匀，于4℃放置2...

1.  1 ~30 mg/ml 的抗体在 4℃对 0.1 mol/l NaHCO 3 / 0.5 mol/l NaCl透析 24 h，期间换液3次。透析液的体积应500倍于抗体溶液。 2.  于4℃10 000 g 离心1 h，除去聚集体。 3.  取小份上清测A 280 确定抗体的浓度。用0.1 mol/l ...

1.  用已脱气HPLC级水洗去SE柱的贮存溶剂，流速1 ml/min。在室温以已脱气的SE缓冲液在1 ml/min 流速平衡SE柱30 min 或直至基线稳定。 2.  注射100 μl  缓冲液进行一次空白样品的假层析，检测器设定在210~220 nm，0.1~1.0 AUFS。适宜的设定一般是：100 pmol 时为0.1AUFS，500 pmol 时0.3，1 nmol 时0.5，2 nmol 时1.0 ；作图速度为0.5 c...