细胞质S-100组分的制备实验
1. 测量细胞质提取物的体积,加入0.11倍体积的10×细胞质提取缓冲液,充分混合。 100 000 g 离心2 h。 2. 将上清(S-100)装入透析管中进行透析,直至S-100的电导达到与透析缓冲液一致(KCl 100 mmol/l),25 000 g 离心20 h。 3. 检测上清的电导并测定蛋白质浓度。分装入小管中,液氮中快冻,-80℃保存。 ...
查看详情1. 测量细胞质提取物的体积,加入0.11倍体积的10×细胞质提取缓冲液,充分混合。 100 000 g 离心2 h。 2. 将上清(S-100)装入透析管中进行透析,直至S-100的电导达到与透析缓冲液一致(KCl 100 mmol/l),25 000 g 离心20 h。 3. 检测上清的电导并测定蛋白质浓度。分装入小管中,液氮中快冻,-80℃保存。 ...
查看详情毛细管电泳(capillary electrophoresis,CE):以高压电场为驱动力,以电解质为电泳介质,以毛细管为分离通道,样品组分依据淌度和分配行为的差异而实现分离的一种色谱方法。由于毛细管内径小,表面积和体积的比值大,易于散热,因此毛细管电泳可以减少焦耳热的产生,这是CE和传统电泳技术的根本区别。它有多种分离模式,可以采用液相色谱中的各种检测方法。CE既可以分离带电荷的溶质,也可以通过毛细管胶束电动色谱等分离模式分析中性溶质,CE的高分离效率、高检测灵敏度,样品用量...
查看详情高效液相色谱法是一种重要的色谱分离技术。根据所用固定相和分离机理的不同,一般将高效液相色谱分为分配色谱、吸附色谱、离子交换色谱和空间排斥色谱等。 在分配色谱中,组分在色谱柱上的保留程度取决于它们在固定相和流动相之间的分配系数K:为组分在固定相中的浓度与组分在流动相中浓度之比。 显然,K值越大,组分在固定相上的保留时间越长,固定相与流动相之间的极性差值也越大。因此,出现了流动相为非极性而固定相为极性物质的正相色谱法和流动相为极性而固定相为非极性的反相色谱法。目前应用最广的固定相是通过...
查看详情色谱定量分析的依据是被测物质的量与它在色谱图上的峰面积(或峰高)成正比。数据处理软件(工作站)可以给出包括峰高和峰面积在内的多种色谱数据。因为峰高比峰面积更容易受分析条件波动的影响,且峰高标准曲线的线性范围也较峰面积的窄,因此,通常情况是采用峰面积进行定量分析。 1. 校正因子定量 2. 归一化法 3. 外标法 4. 内标法 5. 标准加入法 校正因子定量: 绝对校正因子fi:单位峰面积所对应的被测物质的浓度(或质量),即样品组分的峰面积与相同条件下该组分标准物质的...
查看详情循环伏安法(Cyclic Voltammetry,CV)是最重要的电分析化学研究方法之一。其仪器简单、操作方便、图谱解析直观,在电化学、无机化学、有机化学、生物化学的研究领域广泛应用。 伏安分析法是在一定电位下测量体系的电流,得到伏安特性曲线。根据伏安特性曲线进行定性定量分析。如以等腰三角形的脉冲电压(三角波)加在工作电极上,得到的电流电压曲线包括两个分支,如果前半部分电位向阴极方向扫描,电活性物质在电极上还原,产生还原波,那么后半部分电位向阳极方向扫描时,还原产物又会重新在电...
查看详情原子核可看作核电荷均匀分布的球体,并象陀螺一样自旋,有磁矩产生,是核磁共振研究的 主要对象。磁矩不为零的原子核存在核自旋。 由此产生的核磁矩μ的大小与磁场方向的角动量P有关: μ=γ P 式中,γ为磁旋比,每种核有其固定值。 而且,P=mh/2π 或μ=mγh/2π 式中,h为Plank常数(6.624×10-27erg.s);m为磁量子数,其大小由自旋量子数L决定,m共有2L+1个取值,或者说,角动量P有2L+1个状态。 必须注意:在无外加磁场时,核能级是简并的,各状态的能...
查看详情荧光分析法在有机电致发光、生物医药、临床诊断等领域得到广泛应用。高性能荧光材料的制备已成为这些领域的研究热点与前沿,而这些荧光材料的荧光量子产率的高低直接影响它们的性能优劣。荧光量子产率(YF)即荧光物质吸光后所发射的荧光的光子数与所吸收的激发光的光子数之比值。它的数值在通常情况下总是小于1。YF的数值越大则化合物的荧光越强,而无荧光的物质的荧光量子产率却等于或非常接近于零。 荧光量子产率一般采用参比法测定。即在相同激发条件下,分别测定待测荧光试样和已知量子产率的参比荧光标准物...
查看详情红外光谱分析是研究分子振动和转动信息的分子光谱。当化合物受到红外光照射,化合物中某个化学键的振动或转动频率与红外光频率相当时,就会吸收光能,并引起分子永久偶极矩的变化,产生分子振动和转动能级从基态到激发态的跃迁,使相应频率的透射光强度减弱。分子中不同的化学键振动频率不同,会吸收不同频率的红外光,检测并记录透过光强度与波数(1/cm)或波长的关系曲线,就可得到红外光谱。红外光谱反映了分子化学键的特征吸收频率,可用于化合物的结构分析和定量测定。 根据实验技术和应用的不同,我们将红外...
查看详情CTAB法:该方法简便、快速,DNA产量高(纯度稍次,适用于一般分子生物学操作)。 CTAB是一种非离子去污剂,植物材料在CTAB的处理下,结合65 °C水浴使细胞裂解、蛋白质变性、DNA被释放出来。CTAB与核酸形成复合物,此复合物在高盐(>0.7 mM)浓度下可溶,并稳定存在,但在低盐浓度(0.1-0.5 mM NaCl)下CTAB-核酸复合物就因溶解度降低而沉淀,而大部分的蛋白质及多糖等仍溶解于溶液中。经离心弃上清后,CTAB-核酸复合物再用70-75%酒精浸泡可洗...
查看详情紫外-可见光谱是用紫外-可见光的物质电子光谱,它研究产生于价电子在电子能级间的跃迁,研究物质在紫外-可见光区的分子吸收光谱。当不同波长的单色光通过被分析的物质时能测得不同波长下的吸光度或透光率,以ABS为纵坐标对横坐标波长λ作图,可获得物质的吸收光谱曲线。一般紫外光区为190~ 400 nm,可见光区为400 ~ 800 nm。 紫外吸收光谱的定性分析为化合物的定性分析提供了信息依据。虽然分子结构各不相同,但只要具有相同的生色团,它们的最大吸收波长值就相同。因此,通过对未知化合物的...
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