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鲑精担体DNA制备实验

1.  将TE缓冲液加入装有干燥鲑精DNA的烧杯中,至鲑精DNA浓度为5~10 mg/ml。用10 ml 吸管反复吹打后,用搅拌棒于4℃搅拌过夜,最终获得一种均匀粘稠液体。 2.  将一个较大的超声波探头插入烧杯液体中,通过超声波将DNA剪切至2~15 kb(平均7 kb )大小的DNA片段。 3.  用缓冲液平衡酚抽提,将经剪切的鲑精DNA溶液移50 ml 锥形管中,加入等体积缓冲液平衡酚,混匀后于3 000 g...

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高碘酸-雪夫氏反应实验

PAS反应显示糖类的原理是由于含有乙二醇基的多糖类,在过碘酸的作用下,氧化产生醛基,此醛塞进而与Schiffs液作用便无色品红变成紫红色染料而附着于含有多糖类的组织上. 碱性品红+2H2SO3→品红亚硫酸(无色)     品红亚硫酸+带醛基物质→无色物 一、实验试剂: 1. 标本选择:一般可用于新鲜干燥的涂片,未染而长期储存的标本也可用。如用瑞氏法染过的标本,先用酸酒精脱色然后进行PAS染色亦可. Schif...

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细胞铁染色实验

骨髓内的铁蛋白及含铁血黄素(细胞外铁)和幼稚红细胞的铁粒(细胞内铁)在盐酸环境下与亚铁氰化钾作用生成亚铁氰化铁,即普鲁士蓝反应. 一、 实验试剂: 1. 4%盐酸溶液,小心取浓盐酸(38%)40ml慢慢滴加至冷蒸馏水340ml中,边加边搅拌,此液在室温下保存数月.2.40g/L亚铁氰化钾溶液,(在室温可保存数月)3. 碱性复红(BasicFucbsin)贮存液:溶解碱性复红1g于无水乙酸10ml及5%的碳酸溶液90ml以上混匀.4.复...

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非特异性酯酶染色实验

NAE将α-乙酸萘酚水解,产生α-萘酚,再与重氮盐偶联,生成不溶性的有色沉淀位于胞质中。 1. 标本必须新鲜,应于取材后两天内染色,否则酶的活性显著降低.若冰箱内保存,可适当延长保存时间. 2. 重氮盐的选择,以坚固蓝B.坚固蓝RR及坚固黑B重氮盐的染色为好. 一、 实验试剂: 1. 作用液:l/20mol/L  磷酸盐缓冲液(PH7.4)40mg加10g/Lα-乙酸萘酚(以50%丙酮做溶...

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苏丹黑染色实验

苏丹黑(Sudan black B,SB)是一种脂溶性染料,可溶解于细胞浆内的含脂结构中,使胞浆中的脂类物质呈棕黑色或深黑色颗粒。 一、实验试剂: 1. 福尔马林液 2. 苏丹黑酒精溶液 (1)贮备液:苏丹黑B0.3g溶于100毫升纯酒精中,在室温中经常振摇,数天后完全溶解; (2)缓冲液:16克酚溶于30毫升纯酒精中,再与含0.3克磷酸氢二钠(Na2HPO...

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过氧化物酶染色实验

细胞中的过氧化物E分解过氧化氢释放出O原子,氧化联苯胺,变为联苯胺兰,使细胞浆中呈现兰黑色颗粒 一、实验试剂: 1. 联苯胺 0.3g    碱性品红     0.3g 亚硝基铁氰化钠饱和水溶液lml(360毫克/毫升)95%二醇,100ml此种溶液保存于棕色玻璃瓶内,可用8-10个月2、3%过氧化氢溶液0.3ml使用前重新配 蒸馏水         25ml ...

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精液显微镜检查实验

一、精子活动率检查 用低倍镜观察有无精子的湿片,随即转为高倍镜,至少观察100个精子中,有尾部运动的精子所占的百分率即为活动率,计算公式为: 精子活动率%=(活动精子数/活动精子数十不活动精子数)× 100 二、精子活动力检查: 检查精子活动率的同时,将活动力按下列标准分级 0级          不活动          死精子 Ⅰ级           活动不良               精子动作迟钝原地转动 Ⅱ级          活动较好         精子活动,但方向...

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浆膜腔液检查实验

渗出液可含有多量浆膜蛋白(又称酸性糖Pr)其等电点在PH3-5之间,在酸性条件下可产生白色雾状沉淀。 一、实验操作:将100ml蒸馏水置于量筒中,加冰乙酸2一3滴混匀。再加待测标本一滴于量筒中,在黑背景下立即观察,如见浓厚的白色云雾状沉淀快速下降,而且无较长的沉淀物为 Kivalta(+)如产生白色混浊不明显下沉缓慢,并较快消失为Rivalta(-) 二、实验结果判断: 清晰不显露雾状            ...

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脑脊液显微镜检查实验

一、细胞总数: 1、直接计数法 csf标本观察,清亮或仅微混,可用此法用滴管吸取已摇匀  csf标本少许直接充入计数板计数室内,静置2-3分钟低倍镜下计数两个计数池四角和中央共10大格内细胞数,即1微升csf的细胞总数. 2、稀释计数法 如标本中cell过多,可用生理盐水和RBC稀释液稀释按上法计数,结果乘以稀释倍数 二、白细胞计数 1、直接计数法:用吸管吸取冰乙酸后全部...

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SDS碱裂解法制备质粒DNA:大量制备实验

用碱和SDS处理可以从大规模(500ml)的细菌培养物中分离质粒DNA,所获得的质粒则可通过柱层析或CsCl-溴化乙锭梯度离心进一步纯化 材料: 缓冲液和溶液: 碱裂解液 I: 50 mmol/L 葡萄糖 25 mmol/L Tris-HCl(pH8.0) 10 mmol/L EDTA(pH8.0) ...

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