无 Ct 值出现 检测荧光信号的步骤有误：一般 SG 法采用 72℃ 延伸时采集，Taqman 法则一般在退火结束时或延伸结束采集信号。 引物或探针降解：可通过 PAGE 电泳检测其完整性。 模板量不足：对未知浓度的样品应从系列稀释样本的最高浓度做起。 模板降解：避免样品制备中杂质的引入及反复冻融的情况。 Ct 值出现过晚（Ct >38） 扩增效率低：反应条件不够优化。设计更好的引物或探针，改用三步法进行反应。适当降低退火温...

基因组编辑技术CRISPR/Cas9被《科学》杂志列为2013年年度十大科技进展之一，受到人们的高度重视。 CRISPR是规律间隔性成簇短回文重复序列的简称，Cas是CRISPR相关蛋白的简称。CRISPR/Cas最初是在细菌体内发现的，是细菌用来识别和摧毁抗噬菌体和其他病原体入侵的防御系统。 在CRISPR/Cas9系统中，酶Cas9在DNA靶位点上进行切割，其中这种靶位点是这样确定的：一种被称作CRISPR RNA（crRNA）的RNA分子利用它的一部分序列与另一种被称作...

作者：解螺旋.流氓兔 解螺旋原创 今天我们来看一下肿瘤微环境中另一个重要组成部分，也是肿瘤君在体内的头号杀手——免疫系统。免疫系统是个训练有素的部队，不同兵种分工合作，维护机体的的安宁与和平。 想想肿瘤君也挺不容易的，和我们一样，从出生开始，就面临着衣食住行的问题。而且鉴于肿瘤君并非合法居民，即使解决了温饱，还要注意不被正规的武装部队咔嚓掉。这些时刻在体内游走的哨兵，一天24h都在监测那些蠢蠢欲动的“非自己人”。 除了生长增殖（血管形成）、具备转移潜能外（黏附分子及基质金属...

作者：解螺旋.大厨 解螺旋原创 摘要：长久以来，肝脏组织再生的细胞来源问题一直是个未解的谜团。通过采用细胞谱系示踪法，即利用响应Wnt信号的Axin2转基因小鼠，作者发现了一群位于肝脏中央静脉周围、具有增殖和自我更新能力的Axin2阳性细胞。这类细胞表达肝祖细胞标志物Tbx3，并且能够从二倍体状态分化为Tbx3阴性的、成熟的多倍体肝细胞，从而维持肝脏的自我更新。此外，位于这类Axin2阳性细胞周边的中央静脉血管内皮细胞可以提供Wnt信号，从而为这类肝干细胞提供良好的微环境。因此，本文...

作者：解螺旋.子非鱼 解螺旋原创 “我的WB又没有杂出来，太桑心了” “哇靠你的WB又没有杂出来，用掉多少抗体了，还买进口的！” “哇靠你的WB又没有杂出来，却一直一轮又一轮的占用着蛋白电泳仪，我等到黄花都谢了！” 麦子说，这些声音贯穿了她整个研究生生涯，WB，虐了她无数遍，然而凤凰涅盘然后浴火重生，她从WB中参悟到了正确应对失败的人生道理。而在正确应对失败的同时，我们也要学会如何避免失败。小鱼今天给大家分享一下在用磷酸化抗体做WB时，应该注意些什么。 1.警惕内部...

作者：解螺旋.蛋炒饭 解螺旋原创 从上期内容我们知道，mTORC1受到的来自机体营养和生长信号的调节方式，也正体现了mTORC1的代谢枢纽的作用。(回复0815查看上期内容)。机体要进行正常的生命活动，必须要在稳态平衡的状态下有序进行，当外界条件有一定变化时，机体能够通过迅速调整避免不必要的浪费或伤害 实际上，从它的代谢调节方式上就可以很方便的理解mTOR的生理方面的功能。rapamycin的长期给药也会让mTORC2的活性受到抑制，其实也并不难理解，当rapamycin长期抑...

作者：解螺旋.老谈 解螺旋原创 lncRNA参与了X染色体沉默，基因组印记以及染色质修饰，转录激活，转录干扰，核内运输等多种重要的调控过程，很多人看到lncRNA的热点还没有过去，经常会问老谈如果没有相关的工作基础，如何开始lncRNA的研究?今天我们就褪去虚伪假衣，研究的大方向是这样子的： 1. 寻找到lncRNA分子 2. lncRNA分子表型研究 3. lncRNA通过何种机制调节表型？ 老谈将这些研究方向及实验手段按层次的方式绘成流程...

作者：解螺旋.流氓兔 解螺旋原创 作为资深分子生物学菜鸟，qPCR一直是心中的痛。从RNA抽提到逆转录再到加样以及数据分析，好像每一步都可以让整个实验挂掉。引物设计是非常重要的一个环节，之前解螺旋也给大家分享了多种引物设计的软件以及方法，在解螺旋的公众号下回复“21”可看到《告别菜鸟——设计PCR引物“一招鲜”》，此文介绍了引物设计的原理以及如何在NCBI上查找序列再运用PP6等软件设计引物；回复“318”可看到《如何用primer-blast设计和验证引物》，此文推荐了NCBI的一...

作者：解螺旋.蛋炒饭 解螺旋原创 新陈代谢简单的概括起来是合成代谢和分解代谢。以一个细胞水平去理解的话，代谢就是从细胞外摄取并利用营养，然后排出利用后的残渣，以此维持细胞生命活动的有序进行，这实际上是一种高度组织的熵减过程，是生命的基本特征。 生命活动需要能量，细胞也需要一些生长以及代谢所必须的相关结构和蛋白，于是也需要一些简单的小分子来合成所需物质，能量和这些小分子都是碳水化合物的分解所得。能量的代谢通常都伴随着物质的代谢，物质循环也伴随着能量的产生与利用，这样的过程需...

作者：解螺旋.子非鱼 解螺旋原创 小师弟屁颠屁颠跑过来：师姐，我要表达一个ras加GFP融合蛋白，怎么设计引物？ 小鱼：你的GFP标签蛋白在载体里还是要你自己插进去？ 小师弟：是我自己插进去。（怎么听来觉得怪怪的······） 小鱼：你打算怎样融合？ 小师弟：是不是这样？酶切 A基因，酶切质粒，把A先插入载体，筛选出克隆，然后酶切B基因，用不同的酶酶切质粒，将B基因插入含A的载体。 ...