表达融合蛋白时,如何把两个基因拼接起来?
作者:解螺旋.子非鱼 解螺旋原创 小师弟屁颠屁颠跑过来:师姐,我要表达一个ras加GFP融合蛋白,怎么设计引物? 小鱼:你的GFP标签蛋白在载体里还是要你自己插进去? 小师弟:是我自己插进去。(怎么听来觉得怪怪的······) 小鱼:你打算怎样融合? 小师弟:是不是这样?酶切 A基因,酶切质粒,把A先插入载体,筛选出克隆,然后酶切B基因,用不同的酶酶切质粒,将B基因插入含A的载体。 ...
查看详情作者:解螺旋.子非鱼 解螺旋原创 小师弟屁颠屁颠跑过来:师姐,我要表达一个ras加GFP融合蛋白,怎么设计引物? 小鱼:你的GFP标签蛋白在载体里还是要你自己插进去? 小师弟:是我自己插进去。(怎么听来觉得怪怪的······) 小鱼:你打算怎样融合? 小师弟:是不是这样?酶切 A基因,酶切质粒,把A先插入载体,筛选出克隆,然后酶切B基因,用不同的酶酶切质粒,将B基因插入含A的载体。 ...
查看详情作者:解螺旋.麦子 解螺旋原创 在一个温暖潮湿、富有营养且井然有序的世界里,充满着辛勤工作的各种细胞。有天,一个细胞受到了刺激,不小心多生产了一些活跃分子EGFR。这个EGFR平时就挺好动的,不过很能干,总是搞一些人肉代购或者把玩胞外零件的活儿,然后根据胞外的小零件(EGF)调整胞内各项活动维持细胞的正常运转。可是EGFR这一下子多了可咋办,于是它就去勾引胞内其他人群:Ras、PI3K、Akt等,这些人群中本来很多人是闲赋休息的(非磷酸化状态),EGFR硬是把大家都激活了(磷酸化状态...
查看详情作者:解螺旋.流氓兔 解螺旋原创 在肿瘤君从原发瘤进入循环系统,从循环系统进入继发器官过程中,粘附分子是肿瘤转移过程中一个必不可少的助力,那肿瘤转移过程还牵扯到其他哪些坏家伙呢?今天兔子就介绍另一组重要的分子——基质金属蛋白酶(Matrix Metalloproteinase, MMP),它起着溶解剂的作用,帮助肿瘤冲破各种束缚从一个地方"钻出来"转移到另一个地方再"钻进去"。 细胞外基质和基底膜的降解与破坏是肿瘤转移多阶段过程中的重要步骤。细胞外基质和基底膜的主要成分可分为...
查看详情作者:解螺旋.子非鱼 解螺旋原创 首先,怎么确定启动子? 一般查阅外文文献,老外把从转录起始位点开始上溯2K-3K的区间算做是启动子。 然而,启动子这么长,怎么知道具体的结合位点序列? 冒着被老板炒鱿鱼的危险,小鱼今天就斗胆告诉大家这一行业秘笈:论如何预测转录因子小姐跟某基因先生的爱巢(启动子结合位点)在哪里。 以转录因子Nf-KB和Ankh基因为例,用UCSC在线网站锁定启动子范围, 在左栏选择Table browes。 在clade选择Mammal,genome选择Human,as...
查看详情作者:解螺旋.墨斗鱼 俗话说“一个好汉三个帮”,TGF-β作为信号通路中的明星人物没几个帮手又怎么能完成信号转导这个艰巨的任务呢!要说在这些明星中谁才是与TGF-β的最佳好基友,那非Smad家族莫属。所以要了解TGF-β信号通路,我们今天先把Smad家族一探究竟。 一.Smad信号转导通路 Smad蛋白(Smad是由线虫的Sma和果蝇的Mad缩写而来)是TGF-β家族受体下游的信号转导分子[1,2]。在哺乳动物中有八个Smad蛋白, Smad1、 Smad1、 ...、 Smad8。 > ...
查看详情作者:解螺旋.大河马 从 Hippo 信号通路被确定以来,因为其在器官大小和肿瘤发生调节中的重要作用(回复394,查看相关内容),研究者们一直致力于发掘新的 Hippo 信号通路的调节因子。其中,核心激酶链蛋白调控 Hippo信号通路是人们研究的重点之一。2006年,Hamaratoglu等人发现两个FERM (4.1, Ezrin, Radixin, Moesin) domain-containing family 蛋白—Merlin (Mer)和 Expanded(Ex)为 Hpo 上...
查看详情作者:解螺旋.张慧慧 假如你想策划肿瘤领域的某个课题,但又苦于是个“路(信号通路)痴”,分不清方向、摸不清头脑,紧张得不知道去往哪条“路”,那也没关系,人间有真情人间有真爱,面儿今天就来帮你从一个一个去认识。先不要着急深入,咱先了解个大概,信号通路专栏(每周五发布)会详细介绍,有兴趣的话可以关注。今天我要跟大家聊一聊癌症发生过程中涉及的一些明星信号通路:P53信号通路、NF-κB信号通路和JAK-STAT信号通路。1.P53信号通路P53基因在肿瘤届算是“影、视、歌”三栖明星了,看看它涉及...
查看详情一般使用RNAi做实验的常规步骤是: 1. 根据目的基因设计靶点序列,构建工具。 2. 工具验证有效性,通过qPCR检测mRNA量的改变。 3. 如果mRNA下降明显, 在目的细胞上进行功能试验。 4. 返回去对工具进行探索,做WB,是否脱靶等工作。 但是大家却经常绕过第二步和第三部,直接由第一步跳到第四步,即构建工具后就直接做WB检测。 这是不对的。因为RNAi的原理是:siRNA与DCIER等蛋白结合形成沉默复合物,结合到靶...
查看详情作者:解螺旋·翠花今天的内容是由翠花在解螺旋干细胞群中跟大家分享来自Cell Stem Cell杂志的的《MSC-Regulated MicroRNAs Converge on the Transcription Factor FOXP2 and Promote Breast Cancer Metastasis》文献精读。 一、摘要:a) 乳腺癌细胞异质性,含有基质细胞,组成了肿瘤微环境;b) 已有报道,乳腺癌和基质细胞的相互作用,乳腺癌发生的关键因素;c) 肿瘤细胞对来自微环境的信号具有高...
查看详情目前,流式细胞术广泛应用于细胞表面和细胞内分子表达特征的分析,界定不同种类的细胞群,测定分离出的亚类纯度,分析细胞的大小和总量,它可以同时分析单个细胞的多个参数。它主要用于检测标记在抗体上的荧光强度,这些荧光抗体则可以检测与特定细胞分子结合的蛋白或配体,如与 DNA 结合的溴化丙啶 (PI) 等。 染色步骤包括:将培养的细胞或组织样品制成单细胞悬液,然后将细胞放入管子或酶标板中与荧光标记或未标记的抗体孵育。之后将细胞放入流式细胞仪中进行分析。悬浮缓冲液中染色的细胞样品通过流式细胞仪时,由...
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