目前，流式细胞术广泛应用于细胞表面和细胞内分子表达特征的分析，界定不同种类的细胞群，测定分离出的亚类纯度，分析细胞的大小和总量，它可以同时分析单个细胞的多个参数。它主要用于检测标记在抗体上的荧光强度，这些荧光抗体则可以检测与特定细胞分子结合的蛋白或配体，如与 DNA 结合的溴化丙啶 (PI) 等。 染色步骤包括：将培养的细胞或组织样品制成单细胞悬液，然后将细胞放入管子或酶标板中与荧光标记或未标记的抗体孵育。之后将细胞放入流式细胞仪中进行分析。悬浮缓冲液中染色的细胞样品通过流式细胞仪时，由...
查看详情作者：孙学军 来源：科学网 抗体是生命科学研究过程中最常用的工具，也是容易出现问题的环节。最突出的一个案例就是刚刚被《细胞代谢》质疑的2014年哈佛大学的年度热点，关于年轻血液中GDF11抗衰老蛋白的研究。说说她们研究中使用的抗体特异性不高，可能所谓的蛋白弄错了。今天的《自然》文章讨论了目前生物学研究中抗体的使用现状与问题，呼吁科学家重视这个问题，要高度怀疑来自试剂公司的抗体有效性。对中国国内研究者，这一点尤其需要重视，我们使用的许多抗体来自美国等西方试剂公司，这些公司虽然的服务质量不错，...
查看详情作者：解螺旋·猫大 PCR引物要怎么设计才好呢？对于引物设计，猫大的口号是： 两大要求，一个对策！！！Oligo6你值得拥有好，废话少说，我们开始。首先，鼠标点击图标打开Oligo 6软件，出现一个标着“select Codon Usage Database”的对话框，不用管它，直接点取消，于是出现如下界面：软件界面看着非常简单，菜单条只有四个选项，菜单条下面是一些快捷按钮，还有一些按钮是灰色的、按不动的。实际上，随着不同的操作，菜单选项和快捷按钮是会出现变化的。强大的功能就隐藏在这些变化...
查看详情作者：高皮＠大静一、分子病毒学1. MERS-CoV（Middle East respiratory syndrome-Coronavirus），全称中东呼吸综合征冠状病毒，属于网巢病毒目冠状病毒科中的冠状病毒属。多年前引起非典的病毒叫做SARS-CoV，两者均属于冠状病毒。冠状病毒主要感染哺乳动物的呼吸道和胃肠道系统，因其形态类似皇冠而得名，病毒颗粒直径约100-160nm，表面具有膜蛋白。图一：MERS-CoV 来源:WHO revises MERS-CoV surveillance a...
查看详情作者：解螺旋.大厨解螺旋出品摘要：经典理论一直认为中枢神经系并不存在淋巴系统，当今的研究发现中枢神经系的脑膜区存在免疫监控功能，然而具体控制免疫细胞进进出出的机制却尚不清楚。然而本月初Nature的一篇文章，似乎帮我们解决了这个疑问！在寻找免疫T细胞进出口的过程中，作者意外地发现在硬脑膜静脉窦旁存在着并行的淋巴管。这类淋巴管：表达淋巴内皮细胞的分子标志物具有清除脑脊液中液体与免疫细胞的功能还与外周免疫系统的颈深淋巴结连通也许正是由于这类淋巴管所在的位置这么独一无二、这么隐晦，难以被发现，从而导...
查看详情作者：解螺旋.APT解螺旋出品蛋白质组学的发展和其技术的发展是紧密联系并相互作用的：一方面蛋白质组学的发展依靠技术进步的推动，另一方面蛋白质组学研究本身反过来又促进了技术的突破。这些支撑蛋白质组学发展的技术不仅包括在蛋白质组学产生以前就出现的双向凝胶电泳和生物质谱技术，也包括蛋白质组学发展过程中出现的一系列定量技术和数据分析方法。到目前为止，蛋白质组学技术已经成为一个完整的系统，主要分为四大类：第一类是凝胶和非凝胶的蛋白质组分离技术；第二类是基于生物质谱技术的蛋白质组学鉴定技术；第三类是蛋白...
查看详情mTOR信号通路的简单激活途径Oncotarget. 2014 Jan; 5(1): 49-66. 关于mTOR通路，你将了解：mTOR蛋白的的发现与鉴定；主要研究手段；mTOR信号通路对肿瘤中的调节；mTOR信号通路对物质代谢和能量代谢的调节。1蛋白发现mTOR，全名mammalian target of rapamycin，雷帕霉素受体蛋白，而目前主要的是研究集中在哺乳动物，所以加了一个mammalian。它是一种丝/苏氨酸蛋白激酶，属于磷脂酰肌醇 3-激酶相关激酶( pho sphati...
查看详情废寝忘餐、呕心沥血、历尽艰辛，终于拿到一张漂亮的Western Blot图，这时却发现不知道如何计算灰度值，肿么办？Don’t worry!翠花今天就跟大家谈谈如何使用AlphaEaseFC 软件来处理Western Blot电泳图吧（下载软件请回复关键字：0614）。首先，鼠标点击图标：打开AlphaEaseFC 软件，然后在“File”中点击“open”，打开一张western blot的结果图，于是出现以下界面：界面分为五个部分，横竖两个菜单条，三个窗口：图片、Tool Box和Cont...
查看详情相信对于肿瘤基础研究的广大入门者来说，如何快速并准确地寻找感兴趣且有研究前景的课题方向一直是最为关注和棘手的问题。现在我们这里向大家介绍提供一套简单有效的探索方法。众所周知，肿瘤基础研究一般的热点方向主要包括肿瘤增殖调控、肿瘤细胞凋亡机制、肿瘤细胞自噬机制和肿瘤细胞代谢调控等的研究。那么有没有哪个靶点在上述研究方向都有参与，这样研究这一个靶点便能迅速掌握多个方向的机制和研究热点？现在我告诉你，这样的分子的确存在，并且相信大家对它都非常熟悉，它就是p53。那么肯定有人会问p53都已经研究得很透...
查看详情基于质谱的蛋白质组学（proteomics）是近年来研究蛋白质的表达模式与功能模式的一门新兴学科，它能够在大规模的水平上进行蛋白质的表达变化、翻译后修饰以及蛋白质与蛋白质的相互作用等研究。相比于其他的蛋白质研究技术与方法，基于质谱技术的蛋白质组学具有的特点及优势包括：① 对于通常研究的模式动物，基于质谱技术的蛋白质组学的一次实验往往能够输出上千级别的数据量，并且能同时提供定性、定量和翻译后修饰等信息，从而能够从更加全面、整体和网络的角度阐明蛋白质的功能与作用机制；② 质谱技术的分析方法是基于蛋...
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