1.  转染前一天接种呈指数生长的细胞，密度为5×10 5 /10 cm  平板。加10 ml 完全培养液，在开始转染时细胞数应＜10 6 /平板，以留足够供细胞扩增至少2倍的表面积。 2.  用TE缓冲液稀释质粒DNA至1 μg/μl ，4 ℃保存。 3.  将最适量的质粒DNA与500 μl 0.25 mol/l CaCl ...

显微摄影使通过摄影装置,拍摄显微镜视场中被检样品的光学影象的一种技术。 1.  显微摄影装置的安装与调试。 2.  显微镜的光路调整:通过调中，使照明光束与显微镜的光学系统的光轴合一。 3.  装入胶片。 4.  取景聚焦。 5.  暴光： 1/15 s（应先测光:绿灯亮可以正确暴光）。 6.  黑白胶片的冲洗:显影 3 min→停...

细胞与低剂量的药物长期接触，引起细胞本身药物化学过程的改变，细胞膜上出现Pgp糖蛋白，使细胞逐渐对药物耐受，随着药物浓度的递增，其耐受程度逐渐加强。 一、材料准备 1.  动物选择：根据欲建立的耐药细胞株，选择合适的动物。在实验期间，一般选择同性别动物进行实验，动物体重的选择以雌性约17~21g，雄性约18~22 g 为宜。 2.  瘤株的选择：常见的瘤株均可，应依据研究目的、方向确定实验用瘤株，考虑...

1．固定小鼠 a．用绳子将已麻醉的小鼠俯卧（背朝上）固定在鼠板上，绳子用活结，这样不易打滑。固定时要保持小鼠的两只前脚和两只后脚分别在一条直线上。 b．用棉花将小鼠的头微微垫高，这样方便切开皮肤。 2．钻孔 a．将小鼠的头部顺着人字缝皮肤切开大约3~5cm，露出小鼠的头骨。 b．找到小鼠的人字缝在其右边1~2mm处做好钻孔的标记。 ...

肺癌是最常见的严重严胁人类健康和生命的恶性肿瘤之一， 机体免疫功能低下，与肺癌的发生发展密切相关。 一、讨论 NK细胞是一类重要的免疫调节细胞，它具有抗肿瘤、抗感染、免疫调节等作用，它的抗肿瘤机制为： （1）通过其表面的受体，识别肿瘤细胞上的靶结构直接杀伤之，或通过释放可溶性介质来杀伤肿瘤细胞。 （2）NK细胞表面有FcCR受体，它可以与覆盖在肿瘤细胞上的抗体的Fc段相...

TIL 是继LAK 之后的第2 代抗肿瘤效应细胞，是近来实验研究及临床应用的热点之一。目前常规加入IL- 2对TIL 进行培养，但是随着培养时间的延长，TIL 的增殖活性和抗肿瘤活性都有所降低。 一、讨论 用肿瘤特异性T细胞治疗人类恶性肿瘤的一个主要问题是如何获得具有肿瘤特异杀伤力并能在体外扩增足够数量的T淋巴细胞，目前大多数实验室制备TIL是采用机械分离、酶消化、不连续密度梯度离心三步法对实体肿瘤组织进行分离，此法可...

红景天苷不仅具有抗衰老、抗抑郁、抗癌、抗缺氧、保护肝脏、改善心脑血管功能和提高中枢神经系统功能等多种药理作用，还可以起到抗疲劳、抗缺氧、抗肿瘤、抗病毒和增强免疫功能的药理作用。巨噬细胞是机体免疫系统的重要递呈细胞，在特异性和非特异性免疫过程中均发挥着重要的作用。 一、讨论 巨噬细胞免疫调节作用的发挥是通过其抗原提呈、吞噬作用和分泌多种细胞因子而实现的。巨噬细胞发挥其免疫功能的基础是细胞的存活，其存活状态直接影响着其功...

骨骼肌松弛药分为去极化肌松药和非去极化肌松药两大类，去极化肌松药是N2 受体激动药，非去极化肌松药是N2 受体阻断药，两类药均可产生神经肌肉接头阻滞作用，但阻滞方式不同，作用特点也不相同。 泮库溴铵和琥珀胆碱对家兔有何影响？新斯的明对二药作用有无不同？为什么？ 1.  取家兔2只，标号，称重，观察家兔体位.  呼吸.  颈部及四肢肌张力等情况，然后分别肌肉注射阿托品溶液0.5 mL/只，等10 min左右。 2...

普鲁卡因属于短效酯类局麻药，毒性小，但使用不当也会产生毒性反应，部分药物可解救普鲁卡因的中毒反应，有些药物甚至加重其毒性反应，因此临床用药应注意避免中毒的发生，一旦发生中毒应立即选用适当对抗药物解救。 普鲁卡因中毒时可用哪些药物进行解救？ 1.  取健康小白鼠10只，体重18~22 g，观察其正常活动情况。 2.  将小白鼠随机分为5 组，每组2 只，每组小白鼠分别腹腔注射0.05% 戊巴比妥钠.  0.05%...

椎管内注射麻醉药产生不同水平麻醉作用，是临床常用的麻醉方法。家兔椎管内注射普鲁卡因，可观察到椎管麻醉作用的表现，了解普鲁卡因椎管麻醉的特点。 哪些局麻药可用于椎管麻醉？椎管麻醉临床常用于哪些手术的麻醉？ 1.  取健康家兔一只，观察正常活动.  后肢对疼痛的反应及行走步态等情况。 2.  剪去腰骶中部约5×5 cm 2 的兔毛。将兔头夹在实验者左腋下，左手托住臀部，兔身固定于左前臂...