脂质体介导的真核细胞转染实验-脂质体进行稳定转染
1. 接种细胞(见“脂质体介导短暂表达”步骤1)长至50%汇片。 2. 制备DNA/脂质体混合物,转染细胞(见“脂质体介导短暂表达”步骤2和3)。 3. 每孔细胞加入1 ml DMEM-20完全培养液,37℃ 培养箱培养48 h。 4. 吸去DMEM,稀释细胞分传于选择培养液中。将细胞培养适当时间以选择真正被转染的细胞克隆。 ...
查看详情1. 接种细胞(见“脂质体介导短暂表达”步骤1)长至50%汇片。 2. 制备DNA/脂质体混合物,转染细胞(见“脂质体介导短暂表达”步骤2和3)。 3. 每孔细胞加入1 ml DMEM-20完全培养液,37℃ 培养箱培养48 h。 4. 吸去DMEM,稀释细胞分传于选择培养液中。将细胞培养适当时间以选择真正被转染的细胞克隆。 ...
查看详情生活细胞的原生质膜具有选择性吸收物质的能力,而死的细胞原生质膜丧失这种能力,于是红墨水染料可进入死细胞而使其染色。活细胞不能吸收红墨水所以不染色。这一原理仅适用于胚细胞,而胚乳细胞全部被红墨水染成红色,那么是否就判断胚乳细胞就是死细胞?所以染色机理不但与质膜透性有关,而且还与细胞(胚细胞和胚乳细胞)本身的结构和物理性质有关,是一个有待进一步研讨的问题。 1.操作:取TTC法余下的一半种子,置培养皿中,加入5%红墨水染色15分钟,倒去红墨水,然后用自来水冲洗3-...
查看详情有生命活力的种胚呼吸过程中不断进行氧化还原反应,脱下的氢使辅酶(NAD或NADP)还原。当TTC渗入种胚的活细胞内,作为氢的受体被还原性辅酶(NADH+H+或NADPH+H+)上的氢还原时,便由无色的氯化三苯基四氮唑(TTC)变为红色的三苯基甲臜(TTF)。 一、材料和设备 小麦、玉米、花生或水稻种子 恒温箱、培养皿、刀片、镊子 0.1%TTC溶液:称取0.1克TTC先加少量95%乙...
查看详情凡有生活力的种子能不断地进行呼吸作用,吸收空气中的O2,同时放出CO2,CO2溶于水生成H2CO3,H2CO3不稳定解离成H+和HCO3-。由于H2CO3不断解离,就使周围介质酸度逐步增加。用BTB测定出酸度的改变。BTB的分子结构式如图: 它的变色范围为pH6.0-7.6之间,它在酸性介质中呈黄色,在碱性介质中呈蓝色,中间经过绿色(变色点为pH7.1)。 一、材料和设备 玉米或小麦种子 恒温箱...
查看详情硝酸还原酶是植物氮素代谢作用中的关键酶,与作物吸收和利用硝态氮的能力相关。它催化NO3-还原为NO2-的反应: NO3-+NADH+H+→NO2-+NAD++H2O 反应产生的NO2-可从组织内渗透到外界溶液中,定时测定一定的反应溶液中NO2-含量的变化情况则可了解此酶的活性大小。NO2-的定量测定是用磺胺比色法。此法简单易行而又非常灵敏,可测出0.5微克/ ml NaNO2含量的变化。 一、材料和设备 蓖麻、烟草、向日葵、油菜、小...
查看详情单盐毒害和拮抗作用与原生质及原生质膜中的亲水胶体有关,离子价数越高,其消除单盐毒害作用所需的浓度越低。矿质离子特别是阳离子,对原生质的理化性质和生理机能有巨大影响。当某一种离子单独存在时,常能破坏原生质的正常状态而发生毒害作用;如果在单盐溶液中,加入少量的其它盐类,则产生拮抗作用而消除毒害。 一、材料与药品 1.材料:真叶尚未出鞘的小麦或水稻幼苗。 2.仪器:烧杯6只;蜡布或蜡纸(大小以能蒙在烧杯上为准);量...
查看详情1. 按5×10 5 细胞/孔的量在六孔板中接种指数期生长的细胞,在37℃ 5%CO 2 培养箱中 培养过夜,直至细胞80%汇片。(如果用100 mm 培养皿代替六孔扳,则培养细胞至80%汇片,将所有数量扩大8倍) 2. 在聚苯乙烯管中配制DNA/脂质体复合物如下:稀释质粒DNA至1 ml DMEM-SF中,在旋涡混合器上振荡1 s 然后加入脂质体悬液、再次旋起混匀。在室温...
查看详情取新鲜马铃薯去皮,切成5mm见方的小块,分为两组,分别放在2支试管中,其中一组煮沸20分钟,然后分别加入5ml 3% H2O2溶液,观察有什么变化,并加以说明。 几分钟后,在未经煮沸的试管中,加10滴新鲜的邻苯二酚酒精溶液,观察有什么变化,并加以解释。 ...
查看详情过氧化物酶是卟啉环中含有铁的金属蛋白质。过氧化物酶与过氧化氢形成一种化合物,在这种化合物中的过氧化氢被活化,从而能氧化酚类化合物,其作用如同氢的受体一样。 马铃薯块茎,切碎,加到两个试管中,其中一个先煮沸数分钟,然后各加入10滴新鲜配制的1.5%邻苯二酚酒精溶液和5ml 3%H2O2溶液,如有褐色发生,即表示过氧化物酶的存在。 另取一支试管,只加H2O2及邻苯二酚酒精溶液,观察有何结果。 ...
查看详情氧化酶能从代谢物上脱氢,并使其与氧直接结合,生成水或双氧水。如细胞色素氧化酶、抗坏血酸氧化酶、多酚氧化酶等。 一、材料与设备 材料:马铃薯块茎、豌豆叶、洋葱、甘薯及黄瓜等,20ml刻度试管2支、电炉 试剂:1.5%邻苯二酚酒精溶液:1.5g邻苯二酚溶于足够的95%酒精溶液,定容至100ml。 二、实验步骤 1.取去皮的新鲜马铃薯少量,切碎。 ...
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