用层析方法纯化质粒DNA主要利用质粒DNA与初始裂解物中其他分子的物理性 质的差别。核酸带负电，因此可用离子交换层析的方法进行纯化。大分子的 质粒DNA可以通过凝胶过滤层析方法去除小分子杂质而得到纯化。现在许多离子交换 层析纯化系统已经市场化了。因为没有一种方案适合所有的层析方法，所以用厂家所推 荐的方法制备粗裂解物和装柱就尤为重要。 1. 参考...

一般选用外侧耳缘静脉（图1），注射前应先拔去注射部位的被毛，用手指轻弹或轻揉兔耳，左手食指与中指夹住静脉的近心端，阻止静脉回流，使静脉充盈，用拇指和无名指固定耳缘静脉远心端，右手持针尽量从远端刺入，回抽有回血后用左手拇指固定针头，放开食指和中指，将药液注入（图2）。 图1 图2 ...

这种方法可以得到除去了大多数杂质的高纯度质粒DNA。但它需要使用溴化乙锭，并且需要长时间的超速离心来形成密度梯度。 1.  粗裂解物制备方案最后一步得到的沉淀溶于4 ml TE缓冲液中，加人4.4 g CsCl，溶解后，再加人0.4 ml 10 mg/ml溴化乙锭。如果用的是上清（也就是来自于备选方案），按上清的体积依比例扩大CsCl和溴化乙锭。 2.  将溶液转人一个5 ml的quick-seal快速封口的超离心...

一、实验动物的处死方法 1.较大动物的处死方法以下几种方法适用于豚鼠、猫、兔、狗等较大或更大一点的动物。 （1）空气栓塞法：将空气注入动物静脉，使之很快栓塞而死。当空气注入静脉后，可在右心随着心脏的跳动使空气与血液相混致血液成泡沫状，随血液循环到全身。如进入肺动脉，可阻塞其分支，进入心脏冠状动脉，造成冠状动脉阻塞，发生严重的血液循环障碍，动物很快致死。一般兔、猫等需注入20～40ml。狗需注入80～15...

大量碱裂解方法不仅相当快捷可靠，而且可获得相当纯净的粗制DNA。煮沸法的大量制备也简单易行， 但得到的DNA比较粗制。高纯度的质粒DNA可通过氯化铯/溴化乙锭平衡离心法或层析法进一步纯化粗制DNA得到。 1.  往5 ml的含选择性试剂（通常是氨苄青霉素）的LB培养基或丰富培养基接种单菌落。于37°C剧烈振荡培养过夜。 2.  往2 L烧瓶中加入500 ml含有适当抗生素的LB培养基，然后加...

《名医别录》对人参的临床药用选择还有“人薓乃重百济者，星系而坚白，味薄於上党，次用高丽，高丽即辽东，形大而虚软，止应择取之尔，实用并不及上党者，不乃百济远矣，百济今属高丽，高丽所献兼有两种”的描述， 一、讨论 近年来对人参的研究更多的是注重对人参的有效成分的研究，如对Rg1、Rg2、Rg3等成分的研究；或是注重人参的某种已知对某种疾病的作用的研究，对于生长环境相似的这三种人参对机体免疫系统影响的比较研究极少。本实验基于这...

将表达GFP的质粒pRNAT-U6/Neo转染人肺腺癌细胞A549，G418筛选获得稳定表达GFP细胞，对比转染前后细胞的生长活性和成瘤性。将转染后细胞原位种植裸鼠预定标准处死。HE染色和免疫组化检测转移灶的位置和数目。利用KODAK  IS2000MM系统检测肿瘤播散情况。 一、实验讨论 基于肿瘤生长、侵袭和转移的“种子和土壤”学说，肿瘤细胞在体内的生长和播散具有器官特异性。原位种植法模拟肺癌发生的自然环境，是建立肺癌转移模...

一、实验讨论 建立一种符合人体胃癌组织自然生长状态的侵袭和转移的理想模型是研究胃癌发病机制及防治措施的关键所在。最初的人胃癌裸鼠皮下移植瘤尽管在形态、生化特征及功能方面与人胃癌十分相似，但是由于肿瘤组织周围结缔组织的包裹等因素限制了肿瘤的转移，从而不能较真实地模拟人体内胃癌的发生与发展。随着实验方法的不断改进，原位移植模型能够克服皮下移植模型的不足，它在肿瘤的浸润及转移上更接近临床人胃癌发展的基本规律，与皮下移植模型相比具有显著的优越性...

人胃腺癌SGC27901 细胞株，裸鼠皮下注射(2×106/L 细胞悬液) ，成瘤后反复传代形成实体瘤，以第6 代瘤源为组织材料，打开腹腔，通过“生物胶粘贴法”用OB 医用生物胶将瘤块粘贴在裸鼠胃壁胃大弯血管分布稠密处；待荷瘤鼠出现衰竭体征濒临死亡时处死解剖检查。 一、实验讨论 体外实验虽然能在一定程度上反映胃癌细胞的运动能力和侵袭能力，但是不能完全替代体内胃癌转移的器官环境及转移效果， 因此体内移植模型成为肿瘤实验研...

用人胃癌组织块SGC-7901 原位移植于SCID小鼠，第4周末移植瘤向淋巴结和肝脏等器官转移， 转移率达66. 7% (2/3) ，第6周末转移率高达100% (10/ 10) 。 一、实验讨论 近年有文献报道用原位移植方法建立肿瘤转移模型。原位移植包括原位接种人类肿瘤细胞株，或原位移植人类肿瘤组织块至裸鼠相应器官两种方法。原位接种人癌细胞株可提高结肠癌、胰腺癌等少数肿瘤的转移率，但不能提高胃癌等人类肿瘤在裸鼠的转移率。F...