粘粒和质粒克隆的纯化实验
1. 通过原位杂交检测硝酸纤维索滤膜上影印菌落。 2. 用无菌的牙签挑出阳性克隆,接种到含适当抗生素的1 ml 冷的LB培养基中,保存在4℃抑制细菌生长。 3. 取1~25 μl 菌悬液涂布在含有相同抗生素的平板上,37℃培养过夜,在直径100 平板上长出25~250个菌落为宜。 4. 将菌落影印在硝酸纤维素滤膜上,变性、复性、烤膜和杂交化。 ...
查看详情1. 通过原位杂交检测硝酸纤维索滤膜上影印菌落。 2. 用无菌的牙签挑出阳性克隆,接种到含适当抗生素的1 ml 冷的LB培养基中,保存在4℃抑制细菌生长。 3. 取1~25 μl 菌悬液涂布在含有相同抗生素的平板上,37℃培养过夜,在直径100 平板上长出25~250个菌落为宜。 4. 将菌落影印在硝酸纤维素滤膜上,变性、复性、烤膜和杂交化。 ...
查看详情各种化学消毒剂对细菌的影响不一,有的使菌体蛋白质变性,有的破坏菌细胞膜,有的能阻碍细菌代谢的某些环节;因而呈现不同的抑菌或杀菌作用。 1. 用1 毫升无菌吸管取萄葡球菌18 小时肉汤培养物0.1 毫升,滴于琼脂平板的中央。 2. 用无菌棉签将菌液均匀涂布于整个平板表面。 3. 待菌液干后,用无菌镊子夹圆形滤纸片,分别蘸取生理盐水,0.1% 新洁尔灭,2.5%碘酒,2% 红汞及2%龙胆紫,轻轻平放于培养基...
查看详情滤菌器由孔径极小,能阻挡细菌通过的陶瓷,硅藻土,石棉或玻璃细纱等制成。种类较多,但常用者为蔡氏(Seitz)滤菌器,由金属漏斗和嵌在其中的石棉滤板组成。各种滤板的滤孔大小不同,EK 板滤孔较小,(EK 为Eatkeimurkg 之缩写,意为无菌)常用以除去一般细菌。 将石棉滤板装入漏斗,用牛皮纸包扎后与滤瓶均高压灭菌,于使用时,打开包纸取出滤菌器,装在滤瓶上,将滤瓶的倒管与抽气机的抽气橡皮管相连。倒入被滤液体,开动抽气机。滤毕,关闭抽气机。先将抽...
查看详情紫外线在波长为2000~3000者具有杀菌能力,细菌经紫外线照射后,可在DNA中产生胸腺嘧啶双聚体,从而干扰了DNA 的复制,使细菌死亡,常用于手术室的空气消毒。但紫外线的穿透性不强,可被普通玻璃及纸片所吸收。 1. 用无菌接种环取大肠杆菌肉汤培养物二环,在整个琼脂平板表面平行密集划线;用同样方法取枯草杆菌划线接种于另一只琼脂平板,分别作好标记。 2. 将己种菌的两个琼脂平板分别去掉皿盖,用镊子通过火焰灭菌后,夹取无菌黑纸片一张,置...
查看详情高压蒸气灭菌是在高压灭菌器内进行。高压灭菌器有坚固的双层金属壁蒸锅和严密的盖,并附有排气及安全阀门,压力表等装置。加水于底部夹层锅内,加热煮沸,使产生的蒸气密闭在容器内,不能向外扩散。因而蒸气压力逐渐升高,温度也随之相应地增高。 1. 加水至锅内达规定的水平面,放入待灭菌的物品,把锅盖按对称的螺旋先后对称用力(切勿单个)依次扭紧,使锅盖确实均匀密闭。 2. 锅下用煤气炉,电炉或火炉加热,若系蒸气加热装置者,则可直接将蒸气通入灭菌器...
查看详情有些细菌能产生色素,可作为鉴别某些细菌的根据。 将金黄色葡萄球菌及绿脓杆菌分别划线接种于琼脂平板上,置37 ℃温箱培养24 小时后,取出观察两菌所产生的色素。金黄色葡萄球菌的色素仅使菌落呈金黄色,属脂溶性色素;绿脓杆菌的色素则弥散至培养基中,使整个培养物呈现绿色,属水溶性色素。 ...
查看详情某些细菌能分解培养基中的含硫氨基酸生成硫化氢,硫化氢与培养基中的醋酸铅或硫酸亚铁作用而生成黑色的硫化铅或硫化亚铁沉淀,黑色沉淀愈多,表示生成的硫化氢量也愈多。 某些细菌能分解培养基中的含硫氨基酸生成硫化氢,硫化氢与培养基中的醋酸铅或硫酸亚铁作用而生成黑色的硫化铅或硫化亚铁沉淀,黑色沉淀愈多,表示生成的硫化氢量也愈多。 ...
查看详情有些细菌具有色氨酸酶,能分解蛋白胨中的色氨酸生成靛基质,但靛基质无色,不易观察,加入柯氏靛基质试剂后,试剂中的对二甲氨基苯甲醛与靛基质结合,形成红色的玫瑰靛基质,很易识别。 将大肠杆菌,伤寒杆菌及乙型副伤寒杆菌分别接种于含有丰富色氨酸的蛋白胨水中,37 ℃培养24~48小时后取出,在上述细菌的培养液内各加入柯氏试剂数滴。略加振摇,静置半分钟后,在两液接触面出现玫瑰红色环者,为靛基质试验阳性以"+"标记之,不出现红色环者为阴性,以"一" 标记之。 ...
查看详情由于各种细菌具有不同的酶,故分解糖类的能力不同,分解糖类后的终末产物亦不一致,例如肠道非致病菌一般均有乳糖酶,能分解乳糖产酸(乳酸,甲酸,乙酸等),尚有甲酸脱氢酶。能将甲酸进一步分解产生气体( CO 2 ,H 2 ),而肠道致病菌一般无乳糖酶,不能分解乳糖,因此,细菌的糖发酵试验,可用于鉴别细菌。 用接种环分别取大肠杆菌,伤寒杆菌和乙型副伤寒杆菌少许,接种于葡萄糖及乳糖发酵管中各一支,置3...
查看详情1.致病性葡萄球菌耐盐,在高盐培养基上能生长; 2. 致病性葡萄球菌能发酵甘露醇。 3. 当颗粒性抗原(如:细菌)与特异性抗体结合后,在有电解质存在的环境下,抗原抗体可凝集成肉眼可见的块状物。 1. 接种环取1-2环脓液标本增菌液,以分区划线的方法接种于6.5%高盐琼脂培养基上,置37℃温箱中,培养24小时。 2. 观察菌特征。 3. 取可疑菌落直接涂片镜检(革兰氏染色) 4. 取可...
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