昆虫细胞的保存和培养实验
1. 将4 ml 含10%胎牛血清的完全昆虫细胞培养基加入一个25 cm 2 培养瓶。取出一支冻存Sf9细胞的安瓿，迅速置于37℃水浴，用手前后剧烈摇动融化之，当安瓿的内容物几乎完全融化时，将安瓿浸入70%乙醇，消毒外壁。 2. 打碎安瓿颈部，将内容物转移至25 cm 2 培养瓶，用手轻轻摇动培养瓶，使细胞分散均匀，于27℃温育2...
查看详情质粒DNA的小量制备实验-碱裂解法
碱裂解法是最常用的小量制备质粒DNA的方法。 1. 接种一个单菌落于5 ml无菌LB培养液中，在37°C培养至饱和状态（过夜）。 2. 取1.5 ml培养液以最大转速离心20 S。弃上清。 3. 沉淀用100 μlGTE溶液彻底重悬并于室温静置5 min。 4. 加人200 μl NaOH/SDS溶液，用指头敲击管壁混匀，于冰上放置5 m...
查看详情葡萄球菌血浆凝固酶试验-试管法
大多数致病性葡萄球菌能产生血浆凝固酶，而非致病株一般不产生。因此，血浆凝固酶试验是鉴别葡萄球菌有无致病性的重要指标之一。葡萄球菌产生的血浆凝固酶有两种，一种是结合凝固酶（用玻片法测试），另一种是游离凝固酶（用试管法检测）。 1. 取含有l：4 稀释的兔血浆0.5 毫升的试管2 支，分别接种金黄色葡萄球菌与表皮葡萄球菌斜面培养物各三接种环，并应细细研磨，使其均匀混悬于血浆中。 2. 置37 ℃水温箱中1～4小时，观察结果，将试管微微...
查看详情葡萄球菌血浆凝固酶试验-用玻片法测试
大多数致病性葡萄球菌能产生血浆凝固酶，而非致病株一般不产生。因此，血浆凝固酶试验是鉴别葡萄球菌有无致病性的重要指标之一。葡萄球菌产生的血浆凝固酶有两种，一种是结合凝固酶（用玻片法测试），另一种是游离凝固酶（用试管法检测）。 1. 取生理盐水两滴，分别置于洁净载玻片的两端。 2. 以灭菌接种环分别取金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌培养物少许，分别与玻片上的生理盐水制成均匀的细菌悬液，观察有无自凝现象。 3. ...
查看详情病原性球菌的形态染色及培养实验
一、病原性球菌形态染色特征观察 观察葡萄球菌，链球菌，肺炎球菌，脑膜炎球菌及淋球菌革兰染色标本片。注意各。菌的形态，排列及染色性。 二、病原性球菌培养特征观察 1. 观察金黄色葡萄球菌及表皮葡萄球菌在血平板上菌落的形态，大小，表面，边缘，透明度，色素及溶血性，琼脂斜面培养基上菌苔的色素，及甘露醇培养基中发酵情况。 2. 观察甲，乙型链球菌在血平板上菌落...
查看详情细菌的致病性与宿主非特异性免疫实验-溶菌酶试验
溶菌酶是正常体液与分泌液中所含的一种低分子量的碱性蛋白质，它能水解革兰阳性菌细胞壁中的粘肽成份，而致细菌崩解。革兰阴性细胞壁的粘肽外面还有一层脂多糖和脂蛋白，故在一般情况下不受溶菌酶的影响。溶菌酶是非特异免疫中一种重要的体液杀菌成份。 溶菌酶试验说明什么问题 1. 用打孔器在溶壁微球菌琼脂平板上打孔若干个，孔间距离15～20 毫米。用针头挑去孔内琼脂。 2. 先用清水漱口，略待片刻将唾液吐于平皿中，用毛细吸管吸...
查看详情细菌的致病性与宿主非特异性免疫实验-巨噬细胞的吞噬作用
1. 试验前一天，给小鼠腹腔注射2%淀粉水溶液l ml，使巨噬细胞从腹膜血管渗到腹腔。 2. 制备2%鸡红细胞悬液l：取抗凝的鸡血2 ml加生理盐水8-l0 ml，混匀2000 rpm离心沉淀5 min，吸弃上清，同法再洗二次，末次2000 rpm离心沉淀10 min吸弃上清。吸压积的红细胞0.2 ml加入9.8ml生理盐水中，混匀后即为2%鸡红细胞悬液。 3. 24小时前注射淀粉的小鼠，腹腔注射2%鸡红细胞悬液1 m...
查看详情细菌的致病性与宿主非特异性免疫实验-中性粒细胞的吞噬作用
吞噬细胞根据形态大小可分为两类，小吞噬细胞即指中性粒细胞，大吞噬细胞即固定于组织中的巨噬细胞和血液中的大单核细胞。它们对异物有吞噬和消化的功能，是机体自然防御的重要因素之一。 1. 试验前一天，给小白鼠腹腔注入5%淀粉水溶液1 ml。 2. 用注射器吸取葡萄球菌菌液1-2 ml，注入小白鼠腹腔内。 3. 经30 min后，以颈椎脱臼法处死小自鼠，进行尸体解剖，取腹腔渗出液涂片。 4. ...
查看详情细菌的致病性与宿主非特异性免疫实验-破伤风外毒素的毒性作用及破伤风抗毒素的中和作用
外毒素是革兰阳性细菌产生并扩散至菌体外的一种毒性蛋白质。外毒素的毒性很强，而且有亲组织性，能选择性地作用于某些组织和器官，引起特殊病变。但是，细菌外毒素对机体的毒性作用。可被相应抗毒素所中和。对有免疫力或事先给予被动免疫的动物同样剂量的毒素注射时，动物不产生中毒症状，而无免疫力或未进行过被动免疫的动物则可产生中毒症状。 1. 取体重25 g左右健康小白鼠两只，分第标记1，2号。 2. 取1号小白鼠，用右手轻拖鼠尾，使其爬行粗糙物面上...
查看详情细菌的耐药性变异—— R 因子传递实验
应用具有链霉素R 因子的大肠杆菌作为供体菌，对链霉素敏感的痢疾杆菌作为受体菌。经共同孵育后，由于供体菌与受体菌间的接合，供体菌的链霉素R因子转移给受体菌，而使痢疾杆菌获得耐链霉素的特性，因此能在含链霉素的S-S平板上生长。由于痢疾杆菌不分解乳糖而呈无色半透明菌落。大肠杆菌能分解乳糖产酸，在S-S 平板上使指示剂（中性红）显色，故为粉红色不透明的菌落。 1. 将耐链霉素的大肠杆菌与链霉素敏感的大肠杆菌和弗氏痢疾杆菌分别接种于肉汤培养基中，37 ℃培养10～12...
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