Western blot(蛋白印迹)作为科研研究中最为平常的实验，却蕴含了很多知识，可谓是小实验里却有大文章。尽管绝大多数研究僧在接触该实验时都会被虐的体无完肤，却也在和WB斗志斗勇的过程中积累了不少经验。正所谓前人种树，后人乘凉，现在小鱼就把各位前辈做WB的各种经验总结起来，希望对大家能有所帮助。 WB的基本原理 在电场的作用下将电泳分离的多肽从聚丙烯酰胺凝胶转移至一种固相支持体，然后用这种多肽的特异抗体来检测，经常用于目的蛋白的表达特性分析、组织定位、表达...

话说我做硕士课题的时候需要跑磷酸化的AMPK（p-AMPK），当时同组四五个孩子一起跑，效果都很不理想，要么是条带过淡，要么是根本出不来。那几个月的时间我们疯狂的到处请教师兄师姐，在各种实验论坛上寻找改进方法，最终出来效果不错，文章也发了，在此总结几个Western跑磷酸化蛋白的要点，希望各位科研民工们少走弯路。 抗体 工欲善其事必先利其器，抗体很关键。这里我们要说的并不是最贵的就是最好的，如果条件允许，建议同时购买不同厂家的抗体，一起来试一试，因为有时候即使...

衰老是组织和器官功能渐进性衰退的过程。这一过程早被写入了我们的基因里。在“互逆基因多效性理论”中认为，一个特定的基因不仅仅对机体的某一个特征起作用，在自然选择下，这些基因往往有利于物种的繁衍，而在繁殖期之后，就体现出了它们的弊端。 目前，随着突变累积理论，氧化自由基理论等等的提出不难看出，衰老研究逐渐从群体、个体，过渡到“细胞”层面。 “老” 分几步？ 细胞衰老，是细胞响应各种应激增殖，产生永久性阻滞的过程。首先，细胞增殖的过程中，双链染色体端粒逐渐...

Hippo信号通路由一组保守的激酶构成，是一条抑制细胞生长的信号通路。在哺乳动物中，Hippo信号通路上游的膜蛋白受体感受到胞外环境的生长抑制信号后，经过一系列激酶的磷酸化反应，最终作用于下游效应因子YAP和TAZ。YAP和TAZ继而与细胞骨架蛋白相互作用，被滞留在胞质内，不能进入细胞核行使其转录激活功能，从而实现对器官大小和体积的调控。 此外，近年来的研究证实：Hippo信号传导通路还在癌症发生、组织再生以及干细胞的功能调控上发挥着重要的作用。下面，我们就来详细的看看H...

传统的癌症治疗策略认为，最大程度的杀灭癌细胞对患者是最为有利的。但是，近期一项有关乳腺癌的研究指出，化疗将敏感的癌细胞杀死而留下了耐药细胞，耐药细胞因为没有敏感细胞和它“抢食吃”，更加茁壮成长。 1杀死尽可能多的癌细胞 化疗目前被广泛运用于乳腺癌治疗中，传统的治疗方案的目标是尽可能的杀死癌细胞。为了达到这一目的，我们往往使用病人能够耐受的最大剂量强度，以不同的给药节律，控制耐药性的产生。 ...

新药的研发是—件耗资巨大而效率很低的工作，为了增加新药研发的效率，科学家们一直致力于寻找新的药物设计和药物筛选的方法。1990年代，Jencks提出了“基于片段的药物研发”(fragment-based drug discovery，FBDD)这一概念，即通过对于靶标结合的片段分子筛选和优化可以得到新颖的药物实体。Cell一篇综述详细解释和阐述了这一最新的技术，并简单概述了B-RAF、HSP90和BACE的开发过程。 什么是FBDD技术？ FBDD是最近十年来...

随着高通量测序和许多科学家的深入研究，大家越来越熟知非编码RNA（ncRNAs）的流弊功能，目前它们是：生物标注物的主要来源；潜在的疾病治疗靶标；全基因组关联研究（GWAS）中非编码突变功能的潜在解释。当然这也是小伙伴们写标书啊、文章啊、畅谈项目时候眼中闪闪有光的原因所在。 ncRNAs中风头正劲的非lncRNAs莫属，很多人都想分一杯羹，但是要入门，在最初查找文献资料的时候许多人却发现，lncRNA咋那么多种类啊？其实由于lncRNA大家争相研究的年代还不是很久远，所以...

小伙伴们，当我们看到国外实验室的英文paper中，很少有用Primer Premier5 设计引物，但看我们中文的paper，或是国内实验室发的SCI，很多人用到了Primer Premier5这个软件来设计引物，这是为嘛呢？机智师兄告诉你，Primer Premier5是个商业软件，在国外是要花钱买的，而且还贵，而国内呢，有一个东西叫做破解版！为了提高我们自己的知识版权意识，这里推荐给大家一个免费的，同样设计引物不错的软件——Primer3Plus，并用NCBI进行引物验证。 ...

人们都说眼睛是心灵的窗口，是与世界沟通的桥梁。眼睛的构造大体分为前房、瞳孔、晶状体、角膜、虹膜、巩膜、视网膜、玻璃体、黄斑、视神经等。其中眼角膜完全透明，位于眼球前部，呈横椭圆形。眼角膜是眼睛最前面的凸形高度透明物质，覆盖虹膜、瞳孔及前房，并为眼睛提供大部分屈光力。加上晶体的屈光力，光线便可准确地聚焦在视网膜上构成影像。作为眼睛和世界之间的窗户，当事故或疾病导致角膜损伤时，则有可能导致视力下降甚至失明。 在角膜的表面包含有一种独特的非角化上皮细胞，其按照一种有序的方式排列...

人们常说，在我们体内的细菌和其他微生物的总数是我们自身细胞的10倍。不少论文也用这个来说明人体细菌的重要性。不过以现在的研究来看，10倍这个数字实在是有待商榷。通过以色列和加拿大的几位研究者对人体细菌与细胞的数量进行计算，它们之间的比例更可能是1:1。 一个“标准人”（20-30岁，身高1.7米，体重70公斤）平均含有大约30万亿人体细胞和39万亿个细菌，比值为1：1.3。虽然这数字只是个近似值，其可能会在1:0.6到1.2.6之间浮动，但也绝没之前认为的1:10这么夸张...