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Tn5,PiggyBac、睡美人和Tol2转座子

转座子/可转座元件(TE、transposon或跳跃基因)是一种 DNA 序列,可改变其在基因组中的位置,有时可产生或逆转突变,改变细胞的遗传特性和基因组大小。转座通常会导致相同遗传物质的复制。 一般来说,按照转座方式的不同,可将转座子分为三大类:I型转座子(Class I elements),II型转座子(Class II elements)以及Helitron转座子。 图1. 三类转座子[1] I型转座子又...

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位点特异性重组:Flp-FRT 系统和Cre-LoxP系统

DNA重组:是指发生在DNA分子内或DNA分子间核苷酸序列的交换,重排和转移现象,是已有遗传物质的重新组合过程。重组可以分为:同源重组(homologous recombination)、位点特异性重组(site-specific recombination)、转座重组(Transpositon recombination)。 位点特异性重组是一种在特定DNA序列之间发生的遗传重组类型,比如λ噬菌体上的attP位点通过Int和IHF蛋白整合到大肠杆菌基因组上的att...

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I-SceI核酸内切酶介绍及应用

背景知识 针对双链断裂(DSB,Double-strand DNA breaks)细胞主要启动两种“DNA修复”细胞信号转导通路:HDR与NHEJ。 HDR同源重组修复 (Homology directed repair ): 是在两个相似或相同的DNA分子核苷酸序列之间交换的一种遗传重组,并且在断端不会出现核苷酸缺失或增加,能精确地修复DNA双链的断裂。 NHEJ非同源末端连接 (non-homologous end joining...

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λ-Red重组

限制性酶克隆是分子克隆的主力军,但其最大的局限是只能在限制性酶切位点进行序列修饰。λ-Red系统源自λ-Red噬菌体,λ-Red利用同源重组技术可以摆脱限制性内切酶的酶切位点限制,可用于进行各种改造:插入和删除序列、点突变或其他小的碱基对变化,以及添加蛋白质标签。它还能灵活修改细菌染色体、质粒 DNA 或 BAC DNA(细菌人工染色体)。要使用λ-Red重组系统改造目标DNA,首先要将线性供体DNA底物(dsDNA或ssDNA)电转化到表达λ-Red酶的大肠杆菌中。然后,这些酶催化底物与目标 ...

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细菌质粒的接合转移(F因子和RP4质粒)

细菌导入外源基因有几种方式: 1.  转导:是指通过噬菌体将 DNA 从一种细菌转移到另一种细菌的过程。 转导可通过噬菌体的裂解循环或溶源循环进行。裂解途径是当噬菌体侵入细菌后,利用宿主菌的核糖体合成子代噬菌体,引起宿主细菌的裂解死亡,释放出子代噬菌体;溶源途径是溶源性噬菌体(温和性噬菌体)将DNA整合到宿主基因组,随细菌基因组复制而复制,并不裂解宿主菌。 2.  转化:细胞能够从周围环境中摄取DNA分子,并且不易被细胞内的限制...

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7SK、U6和H1启动子

RNA聚合酶Pol III独特地转录小的非编码RNAs,包括5S rRNA(1型)、tRNAs(2型)和其他一些小RNAs(3型),如U6 snRNA。Pol III启动子可以分成三类:类型1、类型2和类型3。其中类型1和类型2启动子位于转录起点的下游,它们分别转录5S rRNA和tRNA,类型3启动子则位于转录起点的上游。 在转录起点下游的类型1启动子包含boxA和boxC两个核心元件;在转录起点下游的类型2启动子则包含boxA和boxB两个核心元件;而在转录起点...

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ColabDesign本地安装及针对靶标蛋白结合多肽设计

ColabDesign利用了一些先进的深度学习模型来进行蛋白质结构的预测和设计。这些模型主要包括: AlphaFold:这是一个由DeepMind开发的大规模机器学习系统,可以在没有任何实验数据的情况下预测蛋白质结构。AlphaFold在CAS(Critical assessment of Structure Prediction)比赛中表现卓越,是目前最先进的蛋白质折叠预测模型。 RoseTT...

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常见去垢剂的类型及临界成胶束浓度(CMC)

根据其结构,去垢剂可大致分为:离子型、两性型和非离子型。 离子型去垢剂含有阴离子或阳离子头基,并带有净电荷。离子型去垢剂胶束的大小由侧链的疏水吸引力和离子基团的排斥力共同决定。因此,随着反离子浓度的增加,头基团上的电荷被中和,胶束体积就会增大。胶束尺寸也会随着烷基链长度的增加而增大。离子型去垢剂在溶解膜蛋白方面非常有效,但几乎总是会在一定程度上使得蛋白质变性。 非离子型去垢剂含有不带电的亲水性头基,由聚氧乙烯分子或糖苷基团组成。由于非离子去污剂能打破脂质-脂质和...

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腺相关病毒载体(AAV)与基因治疗

1 AAV简介 1.1 野生型AAV病毒 腺相关病毒(Adeno-associated viruse,AAV)载体是以AAV 基因组为骨架改造而来的基因递送工具。腺相关病毒属于细小病毒科的低致病性病毒,它的基因组为线性单链DNA,大小约 4.7 kB,在基因组两端分别有一条反向末端重复序列(Inverted terminal repeat,ITR),与病毒基因组高效释放、选择性复制和包装密切相关,基因组编码区有2个开放阅读框,分别编码4种Rep 蛋白和3种Cap...

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