1.  用72 ml 水溶解1 g 琼脂糖，在水浴中冷至60℃时，移至通风橱中加入10×MOPS电泳缓冲液和18 ml 12.3 mol/l 甲醛。 2.  铺制凝胶使之凝固，拔去梳子，将凝胶放进电泳池，加入足够的1×MOPS电泳缓冲液使能淹没凝胶面1 mm 左右。 3.  将每份样品的体积用水调整至11 μl，然后加入： （1）5 μl  10×MOPS电泳缓冲液 （2...

1.  对于18 μg DNA溶液，加入10×NaOH/EDTA溶液至1×的浓度，在室温放置5 min。 2.  加入1.5倍体积的1.5 mol/l pH4.5乙酸铵缓冲液中和。 3.  加2.5倍体积乙醇-70℃沉淀15 min，离心，沉淀用70%乙醇洗涤后，在Speedvac蒸发器中干燥5 min。 4.  重溶于55 μl 水中，替代M13模板步骤3中的单链模板进行其后的操作。 ...

该方法利用mRNA上的寡聚A可与较联寡聚T的纤维素柱在高盐下以碱基配对形式发生亲和吸附，而在低盐下，碱基配对能力破坏，吸附解除，而其他成分的RNA则不具该特性，因此在高盐下当RNA抽提样品流经该柱时，mRNA被挂在柱上，而其他RNA则随高盐溶液流出；当用低盐洗脱液洗柱时，mRNA随洗脱液流出。再用有机溶剂沉淀则可得纯化mRNA。 1.  DEPC处理层析柱。 2.  0.1 M NaOH处理Oliga(dT）－纤维素。 ...

该方法利用mRNA上的寡聚A可与较联寡聚T的纤维素柱在高盐下以碱基配对形式发生亲和吸附，而在低盐下，碱基配对能力破坏，吸附解除，而其他成分的RNA则不具该特性，因此在高盐下当RNA抽提样品流经该柱时，mRNA被挂在柱上，而其他RNA则随高盐溶液流出；当用低盐洗脱液洗柱时，mRNA随洗脱液流出。再用有机溶剂沉淀则可得纯化mRNA。 1.  DEPC处理层析柱。 2.  0.1 M NaOH处理Oliga(dT）－纤维素。 ...

一、生物素标记的Oligo（dT）探针与mRNA的煺火 1.  在DEPC处理过的1.5 ml Eppendof管中，加入0.2-1 mg 的总RNA和无RNase的水至终体积为0.5 ml。 2.  65℃加热10 min。 3.  加入2 μl 生物素标记的Oligo（dT）探针和12 μl 的20×SSC于RNA中轻轻混匀，室温放置，逐渐冷却平衡至室温，此步操作一般需10 m...

1.  于4℃ 12 000 g 离心从10 ml 细菌培养物回收细胞。 2.  重悬菌体于0.5 ml 裂解缓冲液，并移入微量离心管中，在干冰中冻结。 3.  解冻并用微探头超声发生器以30W超声3次，每次10 s （避免起泡），37℃温育60 min。 4.  加入等体积的酚/氯仿/异戊醇（25：24：1）抽提，于室温微量离心机高速离心5 min，上层水相移入另一干净微量离心管...

1.  培养100 ml 大肠杆菌或500 ml 蓝细菌至对数生长期，加入1/20体积终止缓冲液，置于冰上。 2.  于4℃用JA-10转子17 700 g 离心5 min 收集细胞。 3.  用2 ml STET裂解液重悬细胞，加入100 μl 0.2 mol/l 的VRC，移入15 ml 聚丙烯管子。 4.  加入1 ml 缓冲液平衡酚，振荡1 min 再加1 ml 氯仿，振荡...

1.  研钵和研棒先用液氮冷却，称出15 g 冻结植物组织于研钵中（加液氮保持冻结）。 2.  用研棒磨成粉末，立即转移到一个盛有150 ml，研磨缓冲液和50 ml TLE缓冲液平衡酚的500 ml 烧杯中。 3.  用Poltroon匀浆器，设定在5~6挡匀浆2 min，加入50 ml 氯仿，并用匀浆器在低速下混匀。 4.  将混合物移至500 ml 的Nalgene离心瓶中，于50...

1.  对于单层培奍细胞 （1）每10 cm 培养皿培养的细胞，用冰冷PBS洗涤3次。 （2）每次1 ml 然后用小体积PBS刮下细胞，转移至冰浴的离心管中。 （3）300 g 离心5 min，弃上清，继续冰浴。 2.  对于悬浮培养细胞 （1）300 g 离心5 min，弃上请。 （2）细胞以1/2原体积的冰...

液氮研磨可裂解细胞，促使核蛋白体的解离，使RNA与蛋白质分离，并将RNA释放到溶液中。当加入氯仿时，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA进入水相，离心后可形成水相层和有机层，这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。 一、实验试剂准备 1.  RNA提取缓冲液（CTAB）：2% CTAB（W/V），2% 聚乙烯吡咯烷酮PVP（W/V），100 mM Tris-HCl（pH8.0，DEPC处理的水配置），...