带有外源DNA 的重组质粒，在体外构建后，导入宿主细胞，随着细胞的大量复制、繁殖，才能够有机会获得纯的重组质粒DNA，该过程称之为转化过程。受体细胞经过一些特殊方法（如：CaCl2，RuCl 等化学试剂）的处理后，细胞膜的通透性发生变化，能容许外源DNA 的载体分子通过。 1、从37℃培养16-20 h的平板中挑取一个单菌落(直径2-3 mm)，转到一个含有100 ml LB或SOB培养基的1L烧瓶中。于37℃剧烈振摇培养3 h。一般经验，1 OD ...

液氮    组 织 胍 溶 液 ： 590. 8 g 异 硫 氰 酸 胍 溶 于 400ul DEPC 处 理 的 水 中 ，加 人 25mmol/L Tris-Cl(pH7 .5 ). 20 ml 0. 5mol/L EDTA( pH8. 0 ) ，搅拌 过 夜 ，加水至 950ml，过滤 , 最 后 加 50 ml，β-巯基乙醇。    20%(m/V ) 十二烷基肌氨酸钠    5.7m ol/L CsCl        组 织 重 悬 液 :5 mmo/Ll EDT...

磷酸盐缓冲溶液 (PBS)       硫氰酸胍溶液：4 mol/L 硫氰酸胍，0.lmmol/L Tris-HCl pH7.5，1%β-巯基乙醇         CsCl 5.7mol/：L (DEPC 处 理）       TES 缓冲液:0.1% SDS，10mmol/ LTris-ClpH 7.4 ，lmmol/ LEDTA         3 mmol/L 乙酸钠缓冲液 ( PH5. 2，DEPC处理）         无 水 乙 醇      经 DEFC 处理...

冰冷的磷酸盐缓冲液 (PBS)   137 mmol/L NaCl    2.7 mmol/ l KCl    4.3 mmol/l Na2HP04•7 H20     1.4 mmoI/L KH2PO4  pH7.3      冰冷的裂解缓冲液：50mmcil/LTris-HCl      pH 8.0  lOOmmoL/L NaCl     5 mmoL/LMgCL21)      0.5%(V/V )NkmidetP-40  1000U/ml 胎盘      RNas...

5% Triton X-100       匀浆缓冲液：50 mmol/L NaCl,50 mmol/L Tris-Cl, ( PH7.5),  5 mmol/ L EDTA (pH 8 .0) , 0.5% SDS ,200 ug/ml  蛋甶酶 K         酚 ：氯 仿(1 : 1 )      3 mol/L 乙酸钠 (pH  5.2 )。    乙醇      8 mol/L  氯化锂 1 ) 将 待 处 理 的 组 织 放 置 下...

cDNA第一链的合成： 1.在Ependorf管中加50pmol/L的一种α32PdNTP和1mg/ml的mRNA 10μl（10μg）,100m mol/L甲基氢氧化汞1μl,室温反应l0分钟,使RNA变性. 2.加100m mol/l的β-巯基乙醇2μl和10m mol/l RNase抑制剂2μl,室温放置5分钟.β-巯基乙醇有稳定逆转录酶活性的作用. 3.向上述反应混合物加lmg／ml的引物01igo ...

尤钙镁离子磷酸缓冲盐溶液 (PBS)      10 mmol/L  EDTA (pH8.0 )     0.5% S DS     0. lmol/L 乙酸钠（pH 5.2 )    水平衡的苯酚    乙醇   l mol/L Tris-Cl (pH8.0 )      5mol/L NaCL 1 ) 吸出培养液，用 7m l 冰预冷的无钙镁离子磷酸缓冲盐溶液 ( PBS) 冲洗细胞培养皿 内的单层细胞，重 复1 次....

TRIzol 试剂是分离细胞和组织总 RNA 的即用型试剂，该试剂含有酚和硫氰酸胍单相溶液是 Chomczynsk i和 Sacchi进一步分离 RNA方法的进一步改进。在匀浆或裂解样本过程屮，TRIzol 试剂不仅可裂解细胞，而且可保持 RNA的完整。加入氯仿后离心，溶液则分为水相和有机相，RNA 绝大部分保留于水相，RNA 转到水相后，用异内醇沉淀以获的 RNA，移去水相后，样本中的DNA 和蛋白质吋用连续沉淀获得。用乙醇沉淀吋在中间相获得 DNA.异丙醇沉淀可在有机相获得蛋白...

1.  用水按1：500稀释1 mg/ml 的Hoechst 染液至终浓度2 μg/ml。将稀释染液加于切片上或将玻片浸于染液中，置室温2 min。 2.  室温下，在水中洗2 min，晾干。 3.  在42℃至55℃烘箱中，烘烤玻片30~60 min，取出置室温。 4.  用0.5 g/ml 加拿大香柏油为介质，加上盖玻片，将玻片置室温干燥2天。 ...

1.  将显影的玻片置于玻片架上，浸入盛有水的染色盘中。 （1）1个盘：pH6.8 10 mmol/l 磷酸钠缓冲液，所配的25倍稀释的吉姆萨染液。 （2）3个盘：水。 （3）脱水系列溶液： ①3个盘：分别盛50%、70%和95%乙醇。 ②2个盘：盛有100%乙醇。 ③3个盘：盛有二甲苯。 ...