独特的裂解液/β-巯基乙醇迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶，植物RNA助提剂PLANTaid帮助结合多糖多酚并通过离心去除，然后用乙醇调节结合条件后，RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除， 最后低盐的RNase free H20将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。 一、取500 μl裂解液RLT(已经加入β-巯基乙醇)，转入1.5 ml离心管中，加入50 ...

采用粘末端连接必须对目的DNA分子和载体分子进行酶切以获得相应的粘末端进行连接。酶切可以是单酶切也可以是双酶切。单酶切操作比较简单，但双酶切如果两种酶所用缓冲液成分不同（主要是盐离子浓度不同）或反应温度不同，这时可以采用如下措施解决：1）先用一种酶切，然后乙醇沉淀回收DNA分子后再用另外一种酶切；2）先进行低盐要求的酶酶切，然后添加盐离子浓度到高盐的酶反应要求，加入第二种酶进行酶切；3）使用通用缓冲液进行双酶切。具体要根据酶的反应要求进行，尽量避免星号活力。 ...

独特的裂解液/β-巯基乙醇迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶，植物RNA助提剂PLANTaid帮助结合多糖多酚并通过离心去除，然后用乙醇调节结合条件后，RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除，最后低盐的RNase free H20将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。 一、 新鲜植物组织称重后取100 mg迅速剪成小块放入研钵（冰冻保存或者液氮保存样品可直接称重后取100 m...

真核生物的mRNA 5′端有个帽子结构，3′端有长约200 bp 的poly(A)尾巴。据此特点，可设计一种与其互补的序列oligodT，为了把它锚定在poly（A）尾的起始端，将其设计成T12MN（M=A/C/G；N=A/T/C/G），这样T12MN 就有12种不同的组合。将T12MN 作为反转录引物，就可以将带有poly（A）尾的mRNA反转录为相应的cDNA，再用该引物锚定cDNA第二链的3′端，此时引入一随机引物进行PCR 扩增，由于随机引物随机结合在cDNA的互补靶位点上...

大多植物病毒RNA 为单链RNA ，并且其极性与mRNA 极性相同，植物病毒RNA 提取较为简单，一般使用酚氯仿即可获得满意结果。 一、实验材料准备 1.  材料 提纯TMV病毒液（10 mg/ml）。 2.  设备 冷冻台式离心机，低温真空干燥仪，电泳仪，电泳槽。 3.  试剂 TE-...

1.  先用10 ml 5 mol/l NaOH清洗硅化的层析柱，然后用水冲洗。 2.  取0.5 g oligo（dT）纤维素干粉加1 ml 0.1 mol/l NaOH中，倒入柱内，以约10 ml 水冲洗。 3.  用10~20 ml 加样缓冲液平衡柱子，至流出液pH约7.5。 4  于70℃加热含2 mg 总RNA的水溶液10 min，再用10 mol/l LiCl调节溶液中Li...

在变性条件下将待检的RNA样品进行琼脂糖凝胶电泳，继而按照同Southern Blot相同的原理进行转膜和用探针进行杂交检测。 一、用具的准备 1.  180度烤器皿：三角锥瓶、量筒、镊子、刀片等4小时。 2.  电泳槽：清洗梳子和电泳槽，并用双氧水浸泡过夜，用DEPC水冲洗，干燥备用。 3.  处理DEPC水(2 L)备用。 二、用RN...

Northern blot的基本概述是将RNA样品通过变性琼脂糖凝胶电泳进行分离，再转移至尼龙膜等固相膜载体上，用放射性或非放射性标记DNA或RNA特异性探针对固定于固相膜上的mRNA进行杂交，洗膜去除非特异性结合杂交信号，经放射自显影或现色反应，对杂交信号进行分析。将杂交的mRNA分子在电泳中迁移位置与标准分子量分子进行比较，即可知道细胞中特定的基因转录产物的大小；对杂交信号的强弱比较，可以知晓该基因表达mRNA水平的强弱。 一、RNA转移与固定 ...

一、在适合大小的RNase free离心管中加入1体积（<1.5 ml）加入各种抗凝剂新鲜血液 (颠倒混匀后)和3体积的红细胞裂解液RLB，颠倒混匀，可轻弹管壁，确保混匀。 二、室温放置10分钟（期间应该颠倒轻弹混匀数次帮助裂解红细胞）。 如果RNA降解严重，可在冰上裂解，但是时间可长一些以充分裂解。 三、12 000 rpm离心20秒，倒弃红色上清，并小心的尽可能多的吸弃上清（...

酶斑点法（薄膜EIA） 实验原理：酶班点测尿液中β－HCG的方法是一种单克隆与多克隆抗体相结合的酶联免疫测定法，其原理为：反应体系为一张经抗β－HCG抗体处理的膜，当尿液通过上层滤膜到达反应膜时，尿被中有HCG分子便与膜上的抗β－HCG抗体结合，于是当加入酶标HCG抗体复合物后，便与膜表面HCG分子上的另一个暴露位点呈特异性的结合，此时，将滤膜剥开，加入酶的底物显色溶液．使复合物着色，届时不同项色的点便可出现． 一、实验试剂： 1、酶...