植物RNA提取实验-液氮研磨法
独特的裂解液/β-巯基乙醇迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶,植物RNA助提剂PLANTaid帮助结合多糖多酚并通过离心去除,然后用乙醇调节结合条件后,RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物,蛋白等杂质去除, 最后低盐的RNase free H20将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。 一、取500 μl裂解液RLT(已经加入β-巯基乙醇),转入1.5 ml离心管中,加入50 ...
查看详情独特的裂解液/β-巯基乙醇迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶,植物RNA助提剂PLANTaid帮助结合多糖多酚并通过离心去除,然后用乙醇调节结合条件后,RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物,蛋白等杂质去除, 最后低盐的RNase free H20将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。 一、取500 μl裂解液RLT(已经加入β-巯基乙醇),转入1.5 ml离心管中,加入50 ...
查看详情采用粘末端连接必须对目的DNA分子和载体分子进行酶切以获得相应的粘末端进行连接。酶切可以是单酶切也可以是双酶切。单酶切操作比较简单,但双酶切如果两种酶所用缓冲液成分不同(主要是盐离子浓度不同)或反应温度不同,这时可以采用如下措施解决:1)先用一种酶切,然后乙醇沉淀回收DNA分子后再用另外一种酶切;2)先进行低盐要求的酶酶切,然后添加盐离子浓度到高盐的酶反应要求,加入第二种酶进行酶切;3)使用通用缓冲液进行双酶切。具体要根据酶的反应要求进行,尽量避免星号活力。 ...
查看详情独特的裂解液/β-巯基乙醇迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶,植物RNA助提剂PLANTaid帮助结合多糖多酚并通过离心去除,然后用乙醇调节结合条件后,RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物,蛋白等杂质去除,最后低盐的RNase free H20将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。 一、 新鲜植物组织称重后取100 mg迅速剪成小块放入研钵(冰冻保存或者液氮保存样品可直接称重后取100 m...
查看详情真核生物的mRNA 5′端有个帽子结构,3′端有长约200 bp 的poly(A)尾巴。据此特点,可设计一种与其互补的序列oligodT,为了把它锚定在poly(A)尾的起始端,将其设计成T12MN(M=A/C/G;N=A/T/C/G),这样T12MN 就有12种不同的组合。将T12MN 作为反转录引物,就可以将带有poly(A)尾的mRNA反转录为相应的cDNA,再用该引物锚定cDNA第二链的3′端,此时引入一随机引物进行PCR 扩增,由于随机引物随机结合在cDNA的互补靶位点上...
查看详情大多植物病毒RNA 为单链RNA ,并且其极性与mRNA 极性相同,植物病毒RNA 提取较为简单,一般使用酚氯仿即可获得满意结果。 一、实验材料准备 1. 材料 提纯TMV病毒液(10 mg/ml)。 2. 设备 冷冻台式离心机,低温真空干燥仪,电泳仪,电泳槽。 3. 试剂 TE-...
查看详情1. 先用10 ml 5 mol/l NaOH清洗硅化的层析柱,然后用水冲洗。 2. 取0.5 g oligo(dT)纤维素干粉加1 ml 0.1 mol/l NaOH中,倒入柱内,以约10 ml 水冲洗。 3. 用10~20 ml 加样缓冲液平衡柱子,至流出液pH约7.5。 4 于70℃加热含2 mg 总RNA的水溶液10 min,再用10 mol/l LiCl调节溶液中Li...
查看详情在变性条件下将待检的RNA样品进行琼脂糖凝胶电泳,继而按照同Southern Blot相同的原理进行转膜和用探针进行杂交检测。 一、用具的准备 1. 180度烤器皿:三角锥瓶、量筒、镊子、刀片等4小时。 2. 电泳槽:清洗梳子和电泳槽,并用双氧水浸泡过夜,用DEPC水冲洗,干燥备用。 3. 处理DEPC水(2 L)备用。 二、用RN...
查看详情Northern blot的基本概述是将RNA样品通过变性琼脂糖凝胶电泳进行分离,再转移至尼龙膜等固相膜载体上,用放射性或非放射性标记DNA或RNA特异性探针对固定于固相膜上的mRNA进行杂交,洗膜去除非特异性结合杂交信号,经放射自显影或现色反应,对杂交信号进行分析。将杂交的mRNA分子在电泳中迁移位置与标准分子量分子进行比较,即可知道细胞中特定的基因转录产物的大小;对杂交信号的强弱比较,可以知晓该基因表达mRNA水平的强弱。 一、RNA转移与固定 ...
查看详情一、在适合大小的RNase free离心管中加入1体积(<1.5 ml)加入各种抗凝剂新鲜血液 (颠倒混匀后)和3体积的红细胞裂解液RLB,颠倒混匀,可轻弹管壁,确保混匀。 二、室温放置10分钟(期间应该颠倒轻弹混匀数次帮助裂解红细胞)。 如果RNA降解严重,可在冰上裂解,但是时间可长一些以充分裂解。 三、12 000 rpm离心20秒,倒弃红色上清,并小心的尽可能多的吸弃上清(...
查看详情酶斑点法(薄膜EIA) 实验原理:酶班点测尿液中β-HCG的方法是一种单克隆与多克隆抗体相结合的酶联免疫测定法,其原理为:反应体系为一张经抗β-HCG抗体处理的膜,当尿液通过上层滤膜到达反应膜时,尿被中有HCG分子便与膜上的抗β-HCG抗体结合,于是当加入酶标HCG抗体复合物后,便与膜表面HCG分子上的另一个暴露位点呈特异性的结合,此时,将滤膜剥开,加入酶的底物显色溶液.使复合物着色,届时不同项色的点便可出现. 一、实验试剂: 1、酶...
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