些菌属能使丙酮酸脱羧，生成中性的乙酰甲基甲醇，通过 KOH和空气的作用，使乙酰甲基甲醇（3-羟基丙酮）转变成双乙酰，双乙酰在α-奈酚和肌酸的催化下，生成红色化合物，为 VP 试验阳性。 将待检菌接种于葡萄糖蛋白胨水培养基，，经 37℃ 培养 48 h 后，按每毫升培养液加 0.1 ml40%KOH（含 0.3%肌酸或肌酐）溶液，48-50℃ 水浴 2 h，或 37℃4 h，充分摇动，观察结果。 实验结果：红色为阳性。 ...

胆盐、去氧胆酸钠和牛磺胆酸钠有选择性地溶解肺炎链球菌，其他链球菌则能耐受这些实际，其机制尚不完全清楚。 试验方法： 1、平板法：去10%去氧胆酸钠溶液一接种环，放在待检菌落上，35℃30min，观察结果。 2、试管法：于0.9ml 18-24h培育的培养液内加入10%去氧胆酸钠溶液0.1ml或牛胆盐0.2ml（同时用盐水作一对照管），混匀，于37℃水浴中作用10-30min。 实验结...

Trizol试剂是一个包含酚、异硫氰酸胍和SDS的单相酸性溶液，其在裂解细胞的同时抑制RNase的活性，随后加入氯仿，酚会大量的溶解在氯仿中。由于DNA和RNA在酸性酚中的溶解性不同，造成DNA分布在下层的氯仿酚溶液中，RNA则分布在上层的水相中，最后用异丙醇沉淀水相中的RNA，并用70%乙醇洗涤沉淀，这样就可以得到比较纯净的总RNA。 一、 先在研钵中加入液氮，再将组织剪成小块在液氮中磨成粉末，用液氮预冷的药匙取50-100 mg组织粉末加入已盛有1 ml的...

定点突变是指通过聚合酶链式反应（PCR）等方法向目的DNA片段（可以是基因组，也可以是质粒）中引入所需变化（通常是表征有利方向的变化），包括碱基的添加、删除、点突变等。 单点突变的原理是从常规E.coli中经纯化试剂盒(Miniprep)或者氯化铯纯化抽提得到质粒。设计一对包含突变位点的引物（正、反向），和模版质粒退火后用PfuTurbo聚合酶“循环延伸”，(所谓的循环延伸是指聚合酶按照模版延伸引物，一圈后回到引物5’端终止，再经过反复加热褪火延伸的循环，这个反应区别于滚环扩...

碱裂解法是一种应用最为广泛的制备质粒DNA的方法，碱变性抽提质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH值高达12.6的碱性条件下，染色体DNA的氢键断裂，双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂，但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离，当以pH4.8的NaAc/KAc高盐缓冲液去调节其pH值至中性时，变性的质粒DNA又恢复原来的构型，保存在溶液中，而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构，通过离心，染色体DNA与不稳定...

某些细菌分泌过氧化氨氢酶，使过氧化氢生成水和初生态氧，继而形成氧分子出现气泡。 一、实验试剂： 3% H2O2溶液，置棕色瓶内于4℃阴暗处保存。 二、实验方法： 先挑取固体培养基上的菌落，置于洁净的玻片上，然后加3%过氧化氢溶液1-2滴。静置1min内产生大量气泡为阳性，不产生气泡为阴性。 注意事项 1. 过氧化氢为3%，应用30%浓的...

用于白喉棒状杆菌染色，异染颗粒可明显地被显示出来，标本直接涂片或细菌涂片均可用改良阿伯特法染色来观察异染颗粒。 实验试剂： 甲液：甲苯胺兰：0.15g   孔雀绿：0.2g 冰醋酸：    lml   95%乙醇：2ml 蒸馏水：  100ml 将各染料先溶于乙醇，然后加入水与冰醋酸的混合液中，充分混匀。静置24h后过滤备用 乙液：...

改良Ryui法 一、实验试剂： A液：5％石炭酸：     10ml 鞣酸：            2g 饱和硫酸铝钾液：10ml B液：结晶紫酒精饱和液 应用液：A液10份，B液1份，混合，室温存放。 二、染色方法： 1. 玻片的处理：要求用新的载玻片，用前须在95％...

抗酸染色直接用于痰标本时，可以适当曾加标本涂片的厚度，以提高检出率。染厚涂片时，须掌握复染色时间，如果背景过深，影响镜检。 碱性复红染色法：（萋纳Ziehl-Neelsen法） 一、实验试剂： 1. 萋纳石炭酸复红溶液： 碱性复红乙醇饱和溶液：10ml 5％石炭酸溶液：       90ml 2. 脱色剂： ...

本染色法是最基本的染色法，可使用于标本涂片或菌落涂片。染色结果将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性两类。 一、实验试剂： 1. 结晶紫溶液： A液：结晶紫：2g，95%乙醇：20ml。 B液：草酸铵：0.8g，蒸馏水：80ml。 需在用前24小时将A液. B液混合，过滤后装入试剂瓶内备用。 2. 碘液： 碘：1...