VP实验
些菌属能使丙酮酸脱羧,生成中性的乙酰甲基甲醇,通过 KOH和空气的作用,使乙酰甲基甲醇(3-羟基丙酮)转变成双乙酰,双乙酰在α-奈酚和肌酸的催化下,生成红色化合物,为 VP 试验阳性。 将待检菌接种于葡萄糖蛋白胨水培养基,,经 37℃ 培养 48 h 后,按每毫升培养液加 0.1 ml40%KOH(含 0.3%肌酸或肌酐)溶液,48-50℃ 水浴 2 h,或 37℃4 h,充分摇动,观察结果。 实验结果:红色为阳性。 ...
查看详情些菌属能使丙酮酸脱羧,生成中性的乙酰甲基甲醇,通过 KOH和空气的作用,使乙酰甲基甲醇(3-羟基丙酮)转变成双乙酰,双乙酰在α-奈酚和肌酸的催化下,生成红色化合物,为 VP 试验阳性。 将待检菌接种于葡萄糖蛋白胨水培养基,,经 37℃ 培养 48 h 后,按每毫升培养液加 0.1 ml40%KOH(含 0.3%肌酸或肌酐)溶液,48-50℃ 水浴 2 h,或 37℃4 h,充分摇动,观察结果。 实验结果:红色为阳性。 ...
查看详情胆盐、去氧胆酸钠和牛磺胆酸钠有选择性地溶解肺炎链球菌,其他链球菌则能耐受这些实际,其机制尚不完全清楚。 试验方法: 1、平板法:去10%去氧胆酸钠溶液一接种环,放在待检菌落上,35℃30min,观察结果。 2、试管法:于0.9ml 18-24h培育的培养液内加入10%去氧胆酸钠溶液0.1ml或牛胆盐0.2ml(同时用盐水作一对照管),混匀,于37℃水浴中作用10-30min。 实验结...
查看详情Trizol试剂是一个包含酚、异硫氰酸胍和SDS的单相酸性溶液,其在裂解细胞的同时抑制RNase的活性,随后加入氯仿,酚会大量的溶解在氯仿中。由于DNA和RNA在酸性酚中的溶解性不同,造成DNA分布在下层的氯仿酚溶液中,RNA则分布在上层的水相中,最后用异丙醇沉淀水相中的RNA,并用70%乙醇洗涤沉淀,这样就可以得到比较纯净的总RNA。 一、 先在研钵中加入液氮,再将组织剪成小块在液氮中磨成粉末,用液氮预冷的药匙取50-100 mg组织粉末加入已盛有1 ml的...
查看详情定点突变是指通过聚合酶链式反应(PCR)等方法向目的DNA片段(可以是基因组,也可以是质粒)中引入所需变化(通常是表征有利方向的变化),包括碱基的添加、删除、点突变等。 单点突变的原理是从常规E.coli中经纯化试剂盒(Miniprep)或者氯化铯纯化抽提得到质粒。设计一对包含突变位点的引物(正、反向),和模版质粒退火后用PfuTurbo聚合酶“循环延伸”,(所谓的循环延伸是指聚合酶按照模版延伸引物,一圈后回到引物5’端终止,再经过反复加热褪火延伸的循环,这个反应区别于滚环扩...
查看详情碱裂解法是一种应用最为广泛的制备质粒DNA的方法,碱变性抽提质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH值高达12.6的碱性条件下,染色体DNA的氢键断裂,双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂,但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离,当以pH4.8的NaAc/KAc高盐缓冲液去调节其pH值至中性时,变性的质粒DNA又恢复原来的构型,保存在溶液中,而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构,通过离心,染色体DNA与不稳定...
查看详情某些细菌分泌过氧化氨氢酶,使过氧化氢生成水和初生态氧,继而形成氧分子出现气泡。 一、实验试剂: 3% H2O2溶液,置棕色瓶内于4℃阴暗处保存。 二、实验方法: 先挑取固体培养基上的菌落,置于洁净的玻片上,然后加3%过氧化氢溶液1-2滴。静置1min内产生大量气泡为阳性,不产生气泡为阴性。 注意事项 1. 过氧化氢为3%,应用30%浓的...
查看详情用于白喉棒状杆菌染色,异染颗粒可明显地被显示出来,标本直接涂片或细菌涂片均可用改良阿伯特法染色来观察异染颗粒。 实验试剂: 甲液:甲苯胺兰:0.15g 孔雀绿:0.2g 冰醋酸: lml 95%乙醇:2ml 蒸馏水: 100ml 将各染料先溶于乙醇,然后加入水与冰醋酸的混合液中,充分混匀。静置24h后过滤备用 乙液:...
查看详情改良Ryui法 一、实验试剂: A液:5%石炭酸: 10ml 鞣酸: 2g 饱和硫酸铝钾液:10ml B液:结晶紫酒精饱和液 应用液:A液10份,B液1份,混合,室温存放。 二、染色方法: 1. 玻片的处理:要求用新的载玻片,用前须在95%...
查看详情抗酸染色直接用于痰标本时,可以适当曾加标本涂片的厚度,以提高检出率。染厚涂片时,须掌握复染色时间,如果背景过深,影响镜检。 碱性复红染色法:(萋纳Ziehl-Neelsen法) 一、实验试剂: 1. 萋纳石炭酸复红溶液: 碱性复红乙醇饱和溶液:10ml 5%石炭酸溶液: 90ml 2. 脱色剂: ...
查看详情本染色法是最基本的染色法,可使用于标本涂片或菌落涂片。染色结果将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性两类。 一、实验试剂: 1. 结晶紫溶液: A液:结晶紫:2g,95%乙醇:20ml。 B液:草酸铵:0.8g,蒸馏水:80ml。 需在用前24小时将A液. B液混合,过滤后装入试剂瓶内备用。 2. 碘液: 碘:1...
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